试验化学之运动分离技术.PPT

* 4. 影响电泳分离的因素 待分离组分性质：所带的电荷、分子大小和性质。电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。 缓冲液的性质：影响解离度、电泳方向。为了保持电泳分子稳定性，缓冲液通常要保持一定的离子强度，一般在0.02－0.2mol/kg。离子强度过低，则缓冲能力差，但如果离子强度过高，会在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子氛）。由于离子氛与待分离分子的移动方向相反，它们之间产生了静电引力，因而引起电泳速度降低。另缓冲液粘度也影响电泳速度。 电场强度：电场强度越大，电泳速度越快。但增大电场强度会引起通过介质的电流强度增大，而造成电泳过程产生的热量增大，产生如下影响： 样品和缓冲离子扩散速度增加，会引起分离带加宽； 产生对流，引起待分离物的混合； 若样品对热敏感，会引起蛋白等活性物质变性； 引起介质粘度降低、电阻下降等。 电场强度增加，介质中心温度较高，导致电泳速度比边缘快，电泳分离带呈弓型；降低电流强度，可以减小生热，但会延长电泳时间，引起分子扩散增加而影响分离效果。故电场强度要合适、适当冷却降温可获较好分离效果。 电渗：液体在电场中，对于固体支持介质的相对移动，称为电渗现象。 由于支持介质表面可能会存在一些带电基团，这些基团电离后会使支持介质表面带电，吸附一些带相反电荷的离子，在电场的作用下向电极方向移动，从而形成介质表面溶液的流动，