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基因工程原理与技术 动物科学技术学院 苏玉虹 现代生物技术 五大工程技术 基因工程 蛋白质工程 细胞工程 酶工程 发酵工程 其中基因工程技术 是现代生物技术的核心技术 基因工程(gene engineering)常和以下名称混用: 遗传工程(genetic engineering); 基因克隆(gene cloning); 分子克隆(molecular cloning); 基因操作(gene manipulation); 重组DNA技术(recombination DNA technique) 克隆(clone): 作名词时，指含有某目的DNA片段的重组DNA分子或含有该重组分子的无性繁殖系. 作动词时，是指基因的分离与重组过程。 ◆基因工程的对象是基因，所以如果是获得商品的话，就是基因的产品，或是改变了遗传性的细胞和个体。如果要获得效益的话，除了经济效益之外，还有巨大的社会效益。 ◆基因工程的对象是基因，而基因要安居才能乐业，也就是说基因需要在宿主细胞中工作，这样，基因工程同一般的土建工程的根本差别在于，它需要在体外操作，然后送到细胞中去进行表现。 基因工程(gene engineering) 基因工程是以分子遗传学为理论基础， 以分子生物学和微生物学的现代方法为手段， 将不同来源的基因(DNA分子)， 按预先设计的蓝图， 在体外构建杂种DNA分子， 然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种、生产新产品、或是研究基因的结构和功能。 在60年代发展出了琼脂糖凝胶电泳和Southern转移杂交技术，这对于DNA片断的分离、检测十分有用，并很快被应用于基因操作实验。 1972年首次构建了一个重组DNA分子，并提出了体外重组的DNA分子进入宿主细胞的过程，以及在其中进行复制和有效表达等问题。 ?第一个重组体的构建 1972年，美国斯坦福大学P.Berg等在PNAS上发表了题为∶ “Biochemical methode for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40:circular SV40 DNA molecules cotaining lamda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69:2904-2909, 1972” 基因操作的基本过程 可用 分/合成、切、连、转、选、鉴 六个字表示 从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了细胞重组DNA分子的受体细胞克隆； 从这些筛选出来的受体细胞克隆，提取出已经得到扩增的目的基因，供进一步分析研究使用； 将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。 ?基因工程的特点 ◆基因工程有两个基本的特点∶分子水平上的操作和细胞水平上的表达。 ◆人们能够在试管里进行分子水平上的操作，象一项工程那样，进行按图施工的操作，构建在生物体内难以进行的重组体，然后将重组的遗传物质引入相应的宿主细胞，让其在宿主细胞中进行工作。 ◆这实际上是进行无性繁殖，即克隆，所以基因工程通常又称为基因克隆。 基因本身也是一个产业 Rockfeller 大学将人肥胖基因出售0.2亿美元（1995年3月） Amgen公司将FKBP神经免疫因子配体转让达3.29亿美元（1997年） Millennium公司以4.65亿美元向Bayer公司转让225种基因的开发权（1998年9月） 基因工程技术及其应用 主要参考书： 1. 吴乃虎。基因工程原理（上、下册），北京：科学出版社，2003 2. 分子克隆实验指南 第三版（上、下册），北京：科学出版社，2002 谢 谢！ 外源基因的克隆与表达 从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段； 在体外，将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上，形成重组DNA分子； 将重组DNA分子转移到适当的受体细胞（寄主细胞），并与之一起增殖； 基因工程的技术组合 五、基因工程的应用 基因工程技术已经在医学、工业、农业等各个领域得到了广泛的应用。 基因工程的基础与应用 在医学上的应用 基因工程被用于大量生产过去难以得到或几乎不可能得到的蛋白质－肽类药物。 胰岛素 1000 磅牛胰 10 克胰岛素 200 升发酵液