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流式细胞仪在水生生物研究中的应用 BD 产品应用专员 宋翼行 Fifi_song@ BD Confidential: Slide 1 Internal use only 水生生物 • 水生生物：种类繁多 • 研究意义：水生生物学、水生生态学、水体环境 • 传统的研究方法： 生理 培养 观察 生化 • 流式细胞仪与水生生物的研究 ： 1. 快速准确地对样本中的单细胞或某一细胞类群进行分析 ； 2. 完成对复杂组分中特定细胞类群的获取 ，为后续的研究奠定基础。 主要内容 水体微型生物 水生动物 环境毒理 BD Confidential slide 3 水体中的微型生物—— “看不见的巨人” 数量巨大： • 超微型真核自养生物：100 cells/mL - 1,000 cells/mL • 聚球藻：1,000 cells/mL - 10,000 cells/mL • 原绿球藻：10,000 cells/mL -100,000 cells/mL • 浮游细菌 ：100,000 cells/mL - 1,000,000 cells/mL • 浮游病毒：1,000,000 cells/mL - 10,000,000 cells/mL 个体微小：  超微型浮游生物：0.2-2μm  纳米级浮游生物：2-20μm  微米级浮游生物：20-200μm Whitman et al., PNAS, 1998; Karl, Nature, 2002 水中微型生物的特点 个体微小：纳米-微米级别 ； 数量巨大：每一滴海水中有100万个细菌 ； 种类繁多：仅培养的不到1% ； 功能复杂：参与所有物质和能量循环 ； 分布广泛：各种极端环境均有发现。 研究手段？ 1. 个体较小，常规显微观察困难； 2. 工作量大，操作繁琐； 3. 显微计数主观，结果不准； 4. 性质功能检测受限制。 BD Confidential slide 5 流式细胞仪技术优势 以其样品制备简单、可进行快速多参数数据采集、测定精确、不易受溶解有机物的 干扰等优越性而成为水生和环境微生物学研究的重要工具。 根据微粒的荧光特性反映出浮游微型生物的大小、形状、结构或者是色素类型 ，从 而对浮游微型生物进行定量和定性研究。对单个细胞进行分选 ，方便对不同种浮游生物 进行分离和富集培养。 水体中微型生物特点： 流式细胞仪特点：  个体微小  灵敏度高；  数量巨大  分析速度快；  水中悬浮性  精确度高；  种类繁多  多参数分析；  功能复杂  具有分选功能；  分布广泛 流式细胞术在水体研究中的应用策略 •河流湖泊 样本采集 •细胞群解聚（振荡/超声） •预过滤（15-35um滤器） 样本处理 •细胞固定/染色标记