基因工程-2-3分子的杂交幻灯片.pptVIP

第一章 基因工程的主要技术原理 第三节 核酸的分子杂交 起源于标准的光学显微镜技术，这种技术曾被用来观察细胞分裂期的染色体形态。 对于许多生物体来说，可以通过染色体的形状或者不同方法的染色来区分。 原位杂交提供了一种通过在光学显微镜下观察染色体的图像，直接定位克隆基因的方法。 原位杂交的优点 不仅能够鉴定出基因存在于哪条染色体上， 还可以提供染色体上基因位置的相关信息。 特点： 原位裂解细胞，不需要分离DNA，RNA或蛋白质样品， 可同时处理大量样品，常用于目的基因的筛选或检测某类细胞或组织中是否存在某一特定的DNA、RNA或蛋白质序列。 经固定剂处理的细胞被黏附在载玻片上，然后用核糖核酸酶和氢氧化钠降解RNA，并使DNA分子变性，单个多聚核苷酸链之间的配对碱基被拆散，而且染色体也在一定程度上被拆开，暴露出通常被包裹在它们结构之中的DNA片段。 将一定量的被标记的基因掺入到制备好的染色体中。 标记基因和它的染色体拷贝杂交，最终在放射性自显影中形成一个黑点。这个黑点的位置表示标记的基因在染色体上的位置。 尽管技术较难，但人们已经利用原位杂交和放射性标记的探针，定位人类细胞遗传图谱上相当数量的基因。 人们用荧光标记物替代放射性标记，将它连接到杂交探针上，探针与DNA分子杂交后，可以通过荧光显微镜直接观察实验结果。如果使用不同的荧光染料，可以同时探测两个或更多的基因，通过