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天然维生素E对哮喘小鼠细胞因子及免疫球蛋白E影响 　　【中图分类号】R72 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2013）03-0017-02 　　支气管哮喘（简称哮喘）是一种严重危害人类尤其是儿童健康的肺部慢性炎症反应性疾病，其作用机制主要是以嗜酸粒细胞、淋巴细胞和肥大细胞等浸润为主的气道慢性变态反应性炎症，其中T淋巴细胞在哮喘的发病机制中起着尤为重要的作用[1]。研究表明，IL-4和IL-13信号转导系统在哮喘发病机制中起重要作用。在非造血的固有气道组织通过IL-4、IL-13受体的信号转导是过敏性气道炎症的主要机制[2，3]。 　　天然维生素E，是色满（苯并二氢呋喃）的衍生物，因其重要的抗氧化功能，作为抗氧化剂已被广泛用于食品及美容品等生活用品中，且已证实无论在营养、生理活性还是在安全性上均优于合成的维生素E[4]。γ-维生素E（γ-VE）为天然维生素E，具有许多重要的生物学活性，除了促进生殖，维持中枢神经系统、心血管系统等功能外还具有免疫调节作用，且γ-VE缺乏与人肺上皮细胞IL-13和IL-4的表达有关[5]。Navarro等[6]研究显示哮喘患者体内免疫失调与Th1类细胞因子分泌不足，Th2类细胞因子产生增加，进而导致免疫球蛋白E（IgE）合成增加有关。因此，本研究采用吸入卵蛋白（OVA）致敏的方法制备小鼠哮喘模型，用γ-VE进行干预，用ELISA检测小鼠血清和肺泡灌洗液IL-13和IL-4水平，以及血清中IgE含量的变化，探讨天然维生素E对哮喘小鼠细胞因子及免疫球蛋白E的影响，为哮喘的治疗提供新的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　SPF级雌性Balb/c小鼠30只，体重18～20g，由中国医科大学动物部提供。随机分为Ⅰ组：哮喘组、Ⅱ组：γ-VE干预组、Ⅲ组：对照组，每组10只小鼠。 　　1.2 方法 　　1.2.1 哮喘模型的制备 　　采用吸入OVA（美国Sigma）致敏法制备哮喘模型。Ⅰ组分别于第0、7、14天腹腔注射0.5mL致敏液（含OVA 10 μg和氢氧化铝凝胶2 mg）致敏；第2l天将小鼠置于密闭箱中，雾化吸入25 g/L的OVA溶液30 min，其中第21～27天每日雾化1次，第28～77天隔天雾化1次，共进行8周；Ⅱ组以上述同样的方法用OVA致敏和激发小鼠，并在每次激发前1 h口服2.5mgγ-VE口服；Ⅲ组用等量生理盐水代替OVA进行腹腔注射和雾化吸入。 　　1.2.2 样品采集与检测 　　最后1次雾化吸入OVA 或生理盐水后24h，小鼠眼球放血，分离血清；用磷酸盐平衡溶液（PBS）灌洗双肺3次，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），离心去沉淀后置-80℃低温冰箱保存备用；其沉淀行瑞士染色，显微镜下按细胞形态做细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞分类计数。 　　1.2.3 细胞因子检测 　　用ELISA检测试剂盒（美国RD）对上述血清及BALF 中IL-13和IL-4进行检测，具体步骤按说明书进行，显色后用ELX808酶标仪（德国BIO-TEK）进行分析，绘制标准曲线，计算IL-13和IL-4含量。 　　1.2.4 血清IgE水平检测 　　用ELISA试剂盒（美国RD）对各组血清中IgE含量进行检测，具体步骤按说明书进行。 　　1.3 统计学处理 　　应用SPSS19.0软件进行统计分析，数据以 （±s）表示，两组间比较采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结 果 　　2.1 小鼠一般情况 　　Ⅰ组小鼠经OVA刺激后，表现精神沉郁、打喷嚏、鼻部痉痒等哮喘相关表现；而小鼠经γ-VE干预后，各喘息症状明显减轻。 　　2.2 小鼠BALF中细胞总数及细胞分类 　　用显微镜对BALF中各类细胞进行计数观察，结果如表1所示：与对照组相比，Ⅰ组小鼠BALF中细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及嗜酸粒细胞数量均明显增加（P0.05）；Ⅱ组细胞数除巨噬细胞外均与Ⅲ组有显著性差异，但各类细胞数及细胞总数均明显少于哮喘组（P0.05）。 　　2.3 细胞因子检测 　　各组血清及BALF 中细胞因子检测结果如表2所示：与Ⅲ组相比，Ⅰ组这两种细胞因子的表达量均明显升高（P0.05），而Ⅱ组中IL-4 和 IL-13 水平明显下降（P0.05），与正常组和哮喘组均有统计学意义（P0.05）。 　　2.4 血清IgE水平 　　哮喘组小鼠血清IgE含量为（668.18±50.17 ng/ml），与正常组（118.81±28.12 ng/ml）相比明显增高，差异有统计学意义（P0.05）。见图1。 　　图1 各组小鼠血清IgE含量 　　3 讨 论 　　天然维生素E，是色满的衍生物，分为生育酚和生育三烯酚