生物化学--蛋白质的分离纯化与鉴定.ppt

二、 蛋白质分子大小与形状 用化学分析法测出蛋白质中某一微量元素的含量，并假设蛋白质分子中只含有一个被测的元素原子，则可以由此计算出蛋白质的最低分子量。 真实分子量为最低分子量的n倍 有时蛋白质分子中某一氨基酸的含量特别少，也可以按照这个原理测定最低分子量 二、 蛋白质分子大小与形状 当用一种半透膜将蛋白质溶液与水隔开时，溶剂分子将向蛋白质溶液中单向扩散，使溶液内的体积增加，液面升高。直到达到一定的静水压力时维持平衡。此时的静水压力就是溶液在平衡浓度时的渗透压。 蛋白质的稀溶液： π：渗透压（大气压） R：气体常数 T：绝对温度 c：溶质浓度（g/L） 测定几个不同浓度的渗透压，用π/c对c作图外推到蛋白质浓度为0，得到截距，代入公式求得分子量。 要求在等电点附近测定，并增高无机盐浓度 装置简单，准确，但不能判别样品是否纯净 二、 蛋白质分子大小与形状 由于浓度差引起的溶质分子的净迁移称为扩散。 利用蛋白质的扩散，根据费克第二扩散定律 测定在两个不同部位的浓度，可以计算出D值 扩散系数一般不单独用来决定分子量，要和其他手段结合 二、 蛋白质分子大小与形状 蛋白质分子在溶液中受到强大的离心力作用时，会发生沉降。 沉降的速度与蛋白质的分子大小、形状和密度；溶液的密度和粘度有关。 研究沉降作用，采用每分钟60000-80000转的高速离心机，相当于重力的