细胞工程-在环境治理中的应用.docVIP

细胞工程在环境治理方面的应用 摘要：细胞工程即是在细胞水平上应用细胞生物学和分子生物学等学科的理论和技术。以细胞融合技术为首的多种细胞工程技术如细胞培养、细胞固定化等技术越来越广泛地应用到环境治理当中。本文简要介绍了细胞工程的基本概念及其在环境治理中的应用状况,并对其应用前景提出展望。 关健词：细胞工程，细胞融合技术，细胞培养，细胞固定化，环境治理 一、细胞工程概论 细胞工程即是在细胞水平上应用细胞生物学和分子生物学等学科的理论和技术,按照人们的 要求,有计划地大规模培养组织和细胞以获得生物极其制品,或以改变细胞的遗传组织或以生产新的品种的工程。围绕着生命活动这一中心,基因工程研究的是分子水平上DNA的复制和遗传信息的表达、蛋白质的合成等;细胞水平上的细胞工程研究的是细胞的增殖、分化、死亡;而个体水平上的研究则是遗传和发育。与基因工程相比,除被转移物质和转移方法不同外,在带有遗传信息的物质的选择、驯化、鉴定等方面二者基本相同;而细胞工程所要求的技术条件、实验设备以及经费等均比基因工程要求低一些,尤其是在人们对基因工程的安全性尚未给出确定的回答之前,细胞工程的价值格外受到重视。细胞工程的主要技术和应用川包括组织和细胞的培养技术,细胞的融合技术,细胞器移植技术,体外受精技术,物理、化学技术等。目前在环境治理中应用较多的是细胞培养技术,细胞的融合技术及物理、化学技术。 (一)细胞培养技术 细胞培养技术包括微生物的培养、植物细胞培养以及动物的组织与细胞培养。微生物的培养主要是指微生物营养结构的研究以及培养方法的研究,其目的是提供用于研究或生产的微生物菌种。植物细胞培养包括植物器官、组织、细胞、原生质体、胚和植株的培养。它是在植物组织技术基础上发展起来的,是指在离体条件下培养植物细胞的方法。与天然植物栽培相比,植物细胞培养因具有如下特点可能会成为能够解决有用代谢物长期供应问题的非常有希望的手段。: 1 植物生产上十万种化学物质,其中相当一部分化学物质难以化学合成或难以用基因一L程 手段来增加其生产。 2 细胞培养的全过程都能有效地得以控制,受环境因素影响较少。 3 可以通过试验手段较快地进行细胞株的筛选和培养条件的优化。 4 在生物反应器中大规模地培养,减少占用耕地面积,降低成本,提高生产率。 5 便于进行有关细胞的代谢途径和代谢规律研究,使植物细胞合成次级代谢物朝着对人们 有用的产物方向进行。 目前已经有植物细胞培养生产有用代谢物的大规模开发事例。 动物细胞培养是在动物体内获取某些器官或组织的细胞,在模拟体内生理条件下,进行离体 培养。常用的培养方法有微导管培养法、微载体培养法和微胶囊培养法。 (二)细胞融合技术 细胞融合(cellfusion )，是指两个或多个细胞融合成一个双核或多核细胞，使一个细胞的遗传物质包括细胞核DNA和核外基因都进人另一个细胞。它是继转化、转导和接合之后一种更有效转移遗传物质的手段。细胞融合技术能克服遗传障碍，实现远源杂交，构建集双亲优良遗传性状于一体的融合子，创造有应用前景的生物}s。其整个过程包括:遗传标记筛选、原生质体的制备、融合与再生、融合子的鉴定。 1.遗传标记的筛选 融合子的筛选是融合过程中的关键。目前采用的亲本遗传标记和筛选主要有下列几种方法。其一为营养缺陷型标记，即融合的双亲为营养缺陷型且为不同的缺陷型(单缺或双缺)，双亲缺陷的原生质体融合后于基本培养基上选择融合子。只有营养缺陷得到互补后的融合子才能恢复生长，亲本不能在基本培养基上生长。其二为抗药性标记，即利用菌种对药物的抗性存在差异。其三是利用荧光色素标记，在荧光显微镜下用显微操作挑出具有双亲两种荧光色素单细胞即为融合子。其四为失活原生质体供体法。其余尚有温度敏感型、糖发酵和同化性能、呼吸缺陷和形态等亲本标记选择方法。在实际应用中也有将上述某些方法结合起来使用，如营养缺陷型与抗药性、抗药性与灭活等。 2.原生质体制备与再生 根据细胞壁的不同结构与组成，菌体的处理方法不同。在制备细菌、放线菌的原生质体时，主要使用溶菌酶，其中革兰氏阳性菌(G一)用溶菌酶处理，革兰氏阴性菌(G一)用溶菌酶加乙二胺四乙酸钠(EDTA)处理。对于酵母、霉菌、大型真菌、植物，由于其细胞壁组成更为复杂，常用纤维素酶、蜗牛酶、几丁质酶等复合酶处理。原生质体的制备过程中受影响的因素主要有培养基成分、培养方法、菌龄、酶浓度、酶处理温度与时间、pH值、渗透压稳定剂等。制备的原生质体已经失去细胞壁，仅有一层厚约lOnm的细胞膜，它具有生物活性，但不是正常的细胞，在普通培养基上不能生长，必须涂布于再生培养基上，使之再生为正常的细胞。再生培养基需补加两类物质:一类是蛋白质、糖类或氨基酸等营养因子;另一类是渗透压稳定剂，如蔗糖(或甘露醇)、