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(1)对葡萄糖异构酶进行定点诱变的过程体现了________和________两种现代生物技术的综合运用。 (2)1的名称叫________;其组成包括目的基因、终止子、标记基因、复制原点和________。 (3)人工合成的引物的特点是________,与________酶发挥生理作用有关。 (4)工业生产上为了充分利用葡萄糖异构酶,常采用________技术。使用此技术的优点是①________________________________ ②__________________________________。 (5)与正常基因相比,经过定点突变后的基因中发生了两对碱基的________,后代中能够合成目的蛋白质的细胞占总数的______。 【思路点拨】 本题考查“小改”的原理及实例,解答本题应突破以下几点: ①对葡萄糖异构酶进行定点诱变,属于蛋白质工程,其实质是对控制蛋白质合成的基因进行改造。 ②基因表达载体的结构组成和各部分结构的功能是突破所有基因表达载体知识的要点。 ③图示比较前后两种基因的碱基对的排列顺序,发现变化的特点。根据半保留复制推测子代DNA变异情况。 【解析】 (1)本题通过对基因的结构的定点诱变实现蛋白质的改造,所以是基因工程和蛋白质工程的综合应用。 (2)1是由质粒和插入的正常基因组成,所以是重组质粒也是基因表达载体。 (3)引物体现了PCR技术,引物本身是DNA聚合酶进行延伸的基础,且引物上含有突变基因。 (4)固定化酶具有能够反复利用的优点,可大大降低生产成本,提高酶的利用率。 (5)正常蛋白质的甘氨酸的密码子是GGU,突变蛋白的脯氨酸的密码子是CCU,说明基因发生了两个碱基的替换,形成的子代细胞中有一半合成正常蛋白质,另一半合成突变蛋白质。 【答案】 (1)蛋白质工程 基因工程 (2)基因表达载体 启动子 (3)含有突变序列 DNA聚合 (4)固定化酶 提高了酶的利用率 降低了生产成本,提高了产物的产量和质量 (5)替换 1/2 变式训练 2.下列关于基因定点诱变技术的说法,正确的是( ) A.对任何蛋白质的改造都可以用基因定点诱变技术 B.对于已知空间结构的蛋白质的改造可以采用基因定点诱变技术 C.基因定点诱变技术是蛋白质工程中必须用到的技术 D.采用基因定点诱变技术通常可以改变蛋白质中多种氨基酸 解析:选B。基因定点诱变技术是“小改”时所用的一项技术,是有目的地改造蛋白质分子中某活性部位的1个或几个氨基酸残基,是改变蛋白质结构的核心技术之一。主要应用于空间结构已知的蛋白质,对于空间结构未知的蛋白质用非定点诱变来进行蛋白质的改造。 利用蛋白质工程改造或者设计制造出的人工蛋白,在活性、稳定性及抗原性等方面都优于天然蛋白质。 1.提高酶的热稳定性 (1)通过替换酶的几种氨基酸,可以提高酶的热稳定性; (2)在蛋白质分子中引入二硫键也可提高蛋白质的热稳定性。 蛋白质工程的应用 2.改变蛋白质的活性 (1)组织纤溶酶原激活物(t—PA)专一激活人体内的纤溶系统,保证血液循环的畅通。 (2)t—PA进入血浆后大部分与纤溶酶原激活剂抑制物形成复合物,并迅速失去活性。 (3)利用蛋白质工程将t—PA分子中的天冬酰胺替换为谷氨酰胺后,t—PA在血液循环中的停留时间会大大延长。 3.合成嵌合抗体 (1)鼠源性的单克隆抗体对癌细胞具有一定的杀伤能力。 (2)鼠源性的单克隆抗体会被人的免疫系统排斥,不能直接用于人体。 (3)嵌合抗体由鼠单克隆抗体的可变区和人体抗体的恒定区组成,抗原性显著下降,而抗体的特异识别功能没有丧失,可用于临床治疗。 科学家对鼠源杂交瘤抗体进行改造,生产出效果更好的鼠—人嵌合抗体,用于癌症治疗。如图表示形成鼠—人嵌合抗体的过程,据图回答: 例3 (1)改造鼠源杂交瘤抗体,生产鼠—人嵌合抗体,属于________(生物工程)的范畴。 (2)图示过程是根据预期的________,设计________,最终必须对________进行操作,此操作中改变的是_____________________ _______________________________________________________。 (3)经过改造的鼠—人嵌合抗体,与鼠源杂交瘤抗体相比较,突出的优点是__________ ____________________________________________________________________________(从免疫角度考虑)。 (4)上述过程中对科学家来说难度最大的是_____________________________________ ____________________________
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