人体显微形学技术综合内容.pptVIP

动物取材与固定;一、动物取材;（二）动物处死的方法： 可采用麻醉法、空气栓塞法、颈椎脱臼或断头、动脉放血等。 1、狗用麻醉法或击头法 2、猫用窒息法 3、兔用栓塞法 4、小白鼠用断颈法 ;（三）动物取材选择 根据实验要求首先选择动物种类，其次选择组织部位及取材的大小，取材时应熟悉组织器官的结构特点。 1、动物选择 2、部位选择 3、切面方向选择 ;;二、动物组织固定;（二）动物组织取材与固定;2、成年猫 窒息法处死 取下列组织 ①神经节（颈胸椎处）入高尔基体固定液中固定 ②脊髓（颈胸椎处）入2%的硝酸银水溶液中固定 ③卵巢 入中性甲醛固定液中固定 ④膈肌入中性甲醛固定液中固定 每班壹只 两组同学完成;3、一月龄家兔 栓塞法处死 ① 取肋间肌，剪成0.2cm×0.2cm见方的肌肉颗粒（共剪100 颗）。 ②取剪好的肌肉组织入蚁酸溶液中固定15min左右，呈半透 明状即可。 ③不经水洗，直接放入1%的氯化金水溶液中浸染15-60min左 右，肉眼观察见肌肉组织呈金黄色即可，如已成棕色表明浸 染过度，所以应随时观察。 ④将已经还原好的肌肉组织用蒸馏水涤数次，放在滤纸上将 组织上的水分沾干，再转入甘油酒精（甘油一份，50%酒精 一份）中保存备用。 ;4、小白鼠 断颈法处死 ① 取小肠，用生理盐水将肠道内清洗干净，剪成2cm长的小段，入Regaud固定液中固定 ;线粒体切片标本的制作;5、脱水透明：在酒精中从低浓度到高浓度依次脱水，100%以下的浓度每次1小时，在100%酒精中2次，每次30分钟，转入二甲苯2次透明，每次30分钟。 6、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡1次，硬蜡1次，每次30分钟，用纸盒或金属包埋盒包埋。（包埋时注意切面方向）;7、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘油，切片厚度2-4微米，在贴片容器中贴片，入37 。C恒温箱中烘烤24小时。 8、脱蜡入水：二甲苯2次，每次10min, 100%酒精中2次,每次5min, 100%以下的浓度每次2min，下行至蒸馏水。 9、媒染：入5%铁明矾水溶液中媒染24小时（ 37 。C恒温箱中）。 10、染色：蒸馏水速洗后入苏木精染液中染色24小时。;11、分色：蒸馏水速洗后入2.5%铁明矾水溶液中分色，数秒后，显微镜下镜检，见细胞核和线粒体呈黑色，细胞质呈无色或灰色即可。此步骤非常关键，一定要不间断镜检。 12、返蓝：自来水浸泡数小时 13、脱水透明：与第8步骤（脱蜡入水）相反方向操作即可。 14、镜检封固：镜下检查，染色合格的切片滴1滴中性树胶，盖上盖玻片。放入凉片盒中。;高尔基体切片标本的制作;7、冲洗：用蒸馏水速洗2次 8、脱水透明：在酒精中从低浓度到高浓度依次脱水，100%以下的浓度每次40分钟，在100%酒精中2次，每次20分钟，转入二甲苯2次透明，每次20分钟。 9、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡1次，硬蜡1次，每次20分钟，用纸盒或金属包埋盒包埋。;10、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘油，切片厚度3-6微米，在贴片容器中贴片，入37 。C恒温箱中烘烤24小时 11、脱蜡入水：二甲苯2次，每次10min, 100%酒精中2次,每次5min, 100%以下的浓度每次2min，下行至蒸馏水。 12、调色：入1%氯化金水溶液中2小时;常规组织切片制作（HE染色）;1、取材： 动物多种组织（如：大动脉、大静脉、腹腔AV伴行处 、疏松结缔组织、膀胱、鼻腔上皮组织 、胃、睾丸、输精管、体皮、脑垂体、大脑皮质、卵巢 等） 2、固定：入中性甲醛固定液中固定24小时 3、冲洗：自来水冲洗时间24小时。 4、脱水透明：在酒精中从低浓度到高浓度依次脱水，100%以下的浓度每次2小时，在100%酒精中2次，每次1.5小时，转入二甲苯2次透明，每次1.5小时。;5、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡2次，硬蜡2次，以上各级每次1-1.5小时，用纸盒或金属包埋盒包埋。 6、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘油，切片厚度6-8微米，在贴片容器中贴片，入37 。C恒温箱中烘烤24小时。;7、脱蜡入水：二甲苯2次，每次10min, 100%酒精中2次,每次5min, 100%以下的浓度每次2min，下行至蒸馏水。 以下程序按教材材要求进行。 注意事项： 在0.5%的盐酸酒精中分色过程中，数秒后，必须要在显微镜下镜检，见细胞核呈蓝色，细胞质呈无色或灰色即可。此步骤非常关键，一定要不间断镜检。;神经元纤维切片的制作;7、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡2次，硬蜡2次，以上各级每次1-1.5小时，用纸盒或金属包埋盒包埋 8、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘油，切片厚度