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血清(浆)蛋白质测定
实验一双缩脲法测定血清蛋白
[原理]
血清(浆) 中蛋白质的肽键(—CO—NH—)在碱性溶液中能与2 价铜离子作用生成稳定的紫红色
络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H N—OC—NH—CO—NH )在碱性溶液中与
2 2
铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm 处有明显
吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，
即可求得蛋白质含量。
[试剂与器材]
1. 6mol/LNaOH 溶液:称取NaOH 240g ，溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子水)约800
ml 中，冷却后定容至1L，贮于有盖塑料瓶中。若用非新开瓶的NaOH ，须先配成饱和溶液，静置
2 周左右，使碳酸盐沉淀，其上清饱和NaOH 溶液经滴定后，算出准确浓度再使用。
2 ．双缩脲试剂:称取硫酸铜结晶(CuS0 ·5H 0)3g 溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子
4 2
水)500ml 中，加入酒石酸钾钠(NaKC H O ·4H 0，用以结合Cu2+ ，防止CuO 在碱性条件下沉
4 4 6 2
淀)9g 和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu 0 的离析)5g，待完全溶解后，在搅拌下加入
2
6mol/ L 。NaOH 溶液100ml，并用蒸馏水定容至lL，置塑料瓶中盖紧保存。此试剂室温下可稳定
半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
3 ．双缩脲空白试剂 除不含硫酸铜外，其余成分与双缩脲试剂相同。
4 ．60～70g/L 蛋白质标准液 常用牛血清白蛋白或收集混合血清(无黄疸、无溶血、乙型肝炎表面
抗原阴性、肝肾功能正常的人血清) ，经凯氏定氮法定值，亦可用定值参考血清或标准白蛋白作标
准。但定值质控血清定值准确性较差，不能用作血清总蛋白测定的标准物。
5 ．仪器 自动生化分析仪或分光光度计。
[操作步骤]
0
（1）操作参数：波长540nm；光径lcm ；温度37 C ；测定模式：终点法；反应时间：15min ，样
本量：试剂量== 1：100 。
（2 ）操作：取试管3 支，标明测定管(U)、标准管(S)、试剂空白管(RB).
双缩脲法测定血清总蛋白操作步骤
加入物(u 1) RB S U
血清 一 — 10
70g/L 蛋白标准液 一 10 一
蒸馏水 10 一 一
双缩脲试剂 1000 1000 1000
0
混匀，置37 C 15min ，在波长540nm 处比色，用蒸馏水调零，测各管吸光度。
Au A
[计算] 血清总蛋白(g/L)= B ×蛋白标准液浓度(g/L)
As A
B
[参考范围]
正常成人参考范围为60～80g/L,长久卧床者约低3—5g/L,60 岁以上约低2g/L,新生儿总蛋白浓
度较低，随后逐月缓慢上升，大约 1 年后达成人水平。
[临床意义]
1．血清总蛋白浓度降低 状腺功能亢进等，均可导致血清总蛋白浓度降
(1)蛋白质合成障碍：当肝功能严重受损时， 低。
蛋白质合成减少，以白蛋白降低最为显著。 (4)血浆稀释：如静脉注射过多低
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