ELISA试剂盒说明书.pdf

小鼠 IL-1 ELISA 用途： IL-1是一种单核因子。1972年Gery等发现人白细胞培养的上清中含有一种可溶性物质，这 种物质可促进小鼠胸腺细胞对植物血凝素(PHA)的有丝分裂反应。 起初命名为淋巴细胞激活 因子(lymphocyte-activating factor, LAF)或内源性热原质(endogenous pyrogen)、 破骨 细胞激活因子 (osteoclast activating factor)、 黑素瘤细胞生长抑制因子 (melanomagrowth inhibitory factor)等，1979年国际统一命名为IL-1。 1. IL-1的产生 IL-1可由多种细胞合成和分泌。 (1)单核细胞、巨噬细胞(如腹腔粘连细胞peritoneal cell,PC)、 树突状细胞等在摄取 抗原抗体复合物后或在抗原提呈过程中可产生 IL-1。在大多数刺激剂刺激外周血单个核细 胞 (PBMC)条件下,IL-1β mRNA水平要高于IL-1α mRNA 20～25倍。　 (2)小鼠巨噬细胞细胞系P388D1、J774、PU5-1.8、 WEHI-3以及人前单核细胞株U937等 在脂多糖(LPS)刺激后都能分泌大量的 IL-1。　 (3)表皮细胞、NK细胞、B细胞、成纤维细胞、内皮细胞、脑胶质星状细胞、肾小球系 膜细胞(mesangial cell)、滑膜衬里细胞(synovial lining cell)、平滑肌细胞、上皮细胞、 胎盘细胞、白血病细胞、PMN等在某些条件下亦可产生IL-1。 许多因素可以直接影响单核-巨噬细胞IL-1的分泌:①细胞因子如巨噬细胞激活因子 (MAF)、集落刺激因子(CSF)、IFN-α、IFN-γ对IL-1产生具有增强作用。②LPS、PPD、BCG 和李斯特菌, 葡萄球菌、链球菌外毒素, 活病毒等也是IL-1产生的刺激剂。 在外周血中 20pg/ml内毒素刺激单核细胞即可产生IL-1，因此在一般培养条件下，由于微量内毒素的污 染可刺激单核细胞分泌IL-1。10ng/ml LPS可使单核细胞合成IL-1增加100倍。③蛋白激 酶C(PKC)的激活剂乙酸肉豆蔻佛波醇(phorbol myristate acetate, PMA)以及钙离子载体 (calcium ionophore)如A23187均具有强烈的刺激作用。④皮质类固醇和前列腺素则对IL-1 的产生有抑制作用。 2. IL-1 的分子结构和基因 完整的人 IL-1α和 IL-1β基因组分别为 10.5kb 和 7.8kb 。 人和小鼠 IL-1 基因定位于 2 号染色体，均含 7 个外显子。IL-1 前体(ProIL-1)为 31kDa，通 过蛋白水解酶裂解形成成熟的 IL-1 分子。IL-1 在不同种属中有较高同源性。在氨基酸水平 上，IL-1α 和 IL-1β 在不同种属同源性分别为 60 ％～70 ％和 75 ％～78 ％；但在同一种属中 IL-1α与 IL-1β 同源性只有25 ％。人IL-1α(PI5.0)和 IL-1β(PI7.0)分别由 159 和 153 个氨基酸 残基组成，分子量约 17.5kDa, 同源性为28 ％。IL-1 对糜蛋白酶敏感。 不同细胞所产生 IL-1 的等电点可有所差异。　 本试剂盒用于定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清液、组织液中的 IL-1 的浓度。 原理： 本试剂盒采用双抗夹心 ELISA 法。小鼠标本中的 IL-1 与生物素化的抗小鼠 IL-1 单抗结合， 并且生物素化的抗小鼠 IL-1 单抗上的生物素与酶标板上 Streptavidin 结合； 加入辣根过氧 化物酶标记的抗小鼠 IL-1，它将与小鼠IL-1 结合而形成免疫复合物。加入 TMB 显色。小鼠 IL-1 的浓度与OD(450nm)成正比。 试剂盒组成： 酶标板(Coated Wells) 96wells Anti-mouse IL-1 Biotin 6ml 浓缩洗涤液(20X)(Washing Concente) 25ml 标准品(Standards) 1 set 显色液 10ml Anti mouse IL-1 POD 6ml 终止液(Stop Solution) 10ml 需要但未提供的材料 1. 可在 4