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富铁锌酵母制备及初步分析 　　摘 要：本实验通过在培养基中添加铁离子和锌离子，驯化筛选出具有耐铁锌能力的富铁-锌酵母，当铁离子浓度为600μg/mL、锌离子浓度为100μg/mL时，生物量达到了13.68mg/mL，铁元素和锌元素的转化率分别为71.56%，59.91%。 　　关键词：驯化；富铁锌酵母；转化率 　　中图分类号：S963.327文献标识码：A 　　铁元素和锌元素是机体必不可少的微量元素，它们在机体内参与了一系列的生理生化反应，是具有重要的生理功能的营养素[1，2]。铁在机体内主要以铁蛋白的形式存在，构成了血红蛋白，肌红蛋白，细胞色素等，参与了氧的运输和组织呼吸过程及多种新陈代谢反应。锌在维持机体的正常生理代谢，及身体和智力的发育有重要作用，同时它还能够增强机体的免疫力。生物体一般以无机盐的形式吸收微量元素，这种方法利用率低，对机体刺激大[3]，而利用酵母的富集能力，可以将微量元素与蛋白等生物大分子结合，利于机体吸收，副作用小[4]。富铁-锌酵母细胞中除有丰富的铁和锌元素外还富有核酸、氨基酸，小肽，维生素、多种消化酶和未知的生长因子等多种利于动物体生长，增强免疫力的营养物质。因此可以作为新型的饲料添加剂，生产新型微生物饲料[5]。 　　1 材料与方法 　　1.1 菌种及试剂 　　啤酒酵母、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、琼脂粉、酵母浸膏、硫酸亚铁、硫酸锌、氢氧化钠、硫酸等。 　　1.2 培养基配制 　　YPD培养基：2%蛋白胨，2%葡萄糖，1%酵母膏，0.11%磷酸二氢钾，0.1%磷酸氢二钾（固体培养基中添加2%琼脂），115℃灭菌20min。 　　铁-锌离子培养基：向YPD培养基中添加800μg/mL硫酸亚铁，200μg/mL硫酸锌（固体培养基中添加2%琼脂），115℃灭菌20min。 　　1.3 菌种的活化 　　将酵母菌液接种到5mL YPD培养基中28℃下180rpm培养24h，置于4℃中待用。 　　1.4 富铁-锌酵母的筛选 　　取1mL活化好的酵母菌培养液，梯度稀释法稀释100倍。再取100uL菌液涂布于铁-锌离子YPD固体培养基上，28℃恒温培养72h，筛选出生长状态好的单菌落、具有耐铁、锌能力的菌种接种到铁-锌离子YPD培养基中活化培养，于180rpmin摇床中培养28℃恒温培养48h，保存部分菌液用于后续试验。将剩余发酵液在4℃下6000rpmin离心20min，收集菌体，经无菌水冲洗2次至无铁锌离子，再次离心，60℃恒温干燥处理，称重后取0.2～0.3g保存菌，用原子吸收分光光度计测定铁锌含量，筛选出铁锌含量高的菌株作为试验所用菌种。 　　1.5 锌离子浓度的确定 　　将活化好的铁锌含量高的菌液按2%的量接种到100mL YPD培养基中，再向其中添加800μg/mL铁离子。锌离子浓度设定为100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL和600μg/mL，做发酵培养基中不同锌离子浓度的单因素试验，分析不同锌浓度对铁锌酵母生物量和富铁锌量的影响。 　　1.6 铁离子浓度的确定 　　将活化好的铁锌含量高的菌液按2%的量接种到100mL YPD培养基中，再向其中添加400μg/mL锌离子。铁离子浓度设定为100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL和1000μg/mL，做发酵培养基中不同铁离子浓度的单因素试验，分析不同铁浓度对铁锌酵母生物量和富铁锌量的影响。 　　1.7 铁-锌离子浓度的确定 　　根据铁、锌离子浓度的单因素试验测量酵母生物量和离子转化率结果，选出锌离子浓度和铁离子浓度各3组相互组合，添加至发酵液培养后经测定分析，确定最优的铁锌离子组合。 　　2 结果与讨论 　　由表1可知，锌离子浓度100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL条件下生物量和转化率均高于其他浓度，因此选取这3组做最后自由组合试验。由表2可知，铁离子浓度在400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL条件下生物量较高，转化率分别为76.51%，72.84%，63.89%，综合考虑酵母内铁含量选这3组铁离子浓度。由表3可知，由生物量和转化率在向发酵液中添加600μg/mL铁离子和时100μg/mL锌离子时，其生物量与最大生物量相差0.612mg/mL，而铁转化率却高11%，因此，最终确定铁离子浓度600μg/mL、锌离子浓度100μg/mL为最佳铁锌离子组合。 　　本试验通过在酵母培养基中添加硫酸亚铁和硫酸锌，成功筛选出了具有富集铁元素和锌元素的富铁-锌酵母，并找到了富铁锌酵母最佳的铁锌浓度，在铁离子600μg/mL，锌离子100μg/mL时，生物量可达13.68mg/mL，