液相与液质分析方法学开发与验证.pdfVIP

HPLC及HPLC/MS分析方法的开发 HPLC及HPLC/MS分析方法的开发 及其在药物分析中的应用 及其在药物分析中的应用 李晓东 中国食品药品检定研究院 北京 100050 E-mail: xdli@nicpbp.org.cn HPLC及HPLC/MS法 HPLC及HPLC/MS法 • 基于分离分析科学技术 – 小颗粒填料的色谱柱 – 以光谱、质谱技术作为检测手段 • 专属性、分离效率及灵敏度 – 适用于广泛的色谱应用 – 适用于开发新方法 – 适用于现有方法的改进 2 分析方法学的开发及验证 分析方法学的开发及验证 • 质量源于设计（Quality by Design，QbD ）准则 • 实验设计方法学 （Design of Experiment，DoE） • 方法验证（Method Validation）：确保方法在样品 分析的一定范围内中准确、重现、可靠、耐用性。 3 实验室获得方法及运用过程 方法开发 分析条件的筛选（色谱柱,流动相,pH等） 及优化（梯度、柱温、流速等） 准确度，精密度，专属性，检测限， 方法验证 定量限，线性，范围，耐用性 法定检验方法在使用环境中适用性评 方法确认 估（人员、仪器、样品、试剂） 非法定检验方法在实验室之间传递的 方法转移 文件化过程 4 实验室获得方法及运用过程 方法验证 - 用一个性质明确的物质来挑战建立的分析方法 方法确认 - 用一个确定方法来挑战现实的分析环境 - 专属性，准确度，精密度，LOD，LOQ - 一般不需要进行线性，范围，耐用性实验 5 方法验证的内容 ICH、USP1225、ChP II Appendix XIX A 准确度（Accuracy） 精密度（Precision）-重复性，重现性，中检精密度 专属性（Specificity） 检测限（LOD） 定量限（LOQ） 线性（Linearity） 范围（Range） 耐用性（Robustness） 6 方法验证-系统适用性 • 系统适用性试验的内容 – 在分析未知样品之前或期间，检查系统以保证系 统之性能达到规定的要求 – 塔板数，拖尾因子，分离度 – 确定重现性（%RSD） • 系统适用性“样品” – 主组份与预期副产物之混合物 – 系统适用性试验是色谱方法的一部分 7 方法验证-系统适用性 • 容量因子 • 拖尾因子 – k 2 – T ≤2 • 精密度/进样重复性 • 理论塔板数 • RSD ≤ 1%, n ≥5 – 通常 N 20