第十一维生素的测定.ppt

第十一章 维生素的测定 第一节 概述 第二节 脂溶性维生素的测定 第三节 水溶性维生素的测定 第一节 概述 维生素是一类维持人体正常生理功能所必需的有机营养素，它们的化学结构、性质和生理功能虽然各不相同，但都不供给热能，也不参与机体组织构成。维生素是天然食物的微量成分，人体每日需要量很少，但维生素缺乏时将引起相关的营养缺乏症。 根据维生素的溶解性质，将其分为脂溶性维生素（VA、VD、VE、VK等）与水溶性维生素（B族维生素、VC等）两大类。脂溶性维生素不溶于水而溶于脂肪及有机溶剂中，在食物中它们常与脂类共存，在酸败的脂肪中容易被破坏，其吸收与肠道中的脂类密切相关。水溶性维生素及其代谢产物较易自尿中排出，体内没有非功能性的单纯的储存形式。 第二节 脂溶性维生素的测定 一、维生素A的测定 二 、β-胡萝卜素的测定 三 、维生素D的测定（HPLC法） 四、维生素E的测定 一、维生素A的测定 原理：维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑作用生成蓝色物质，其深浅与溶液中维生素A的量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定。 测定：样品处理：用皂化法 或研磨法对样品进行预处理；测定：准确取一定量的维生素A标准液于4～5个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。再取相同数量比色管顺次取lmL三氯甲烷和标准系列使用液lmL，各管加入乙酸酐1滴，制成标准比色系列，于620nm波长处以三氯甲烷调节吸光度零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加9mL三氯化锑-三氯甲烷溶液。于6s内测定吸光度，绘制标准曲线图。于一比色管中加入l0mL三氯甲烷，加入1滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入lmL三氯甲烷，其余比色管中分别加入lmL试样溶液及1滴乙酸酐。其余分析步骤同标准曲线的绘制。结果按公式计算： 二 、β-胡萝卜素的测定 原理：试样中的β-胡萝卜素，用石油醚+丙酮(80+20)混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然后以HPLC法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。 三 、维生素D的测定（HPLC法） 原理：将样品皂化，由酯型转化为游离型，用高效液相色谱测定。 取5g～10g样品加1g焦性没食子酸，50mL乙醇溶液，在磁力搅拌器下使样品均匀溶解后加入30mL 50%KOH溶液，在（50±2）℃上搅拌回流40mim。取下回流液，冲凉后用50mL、30mL、20mL、10mL乙醚萃取，合并乙醚层，用水洗至中性，过无水Na2SO4，在50℃下浓缩至约5mL，取下后用甲醇定容至10mL，待测定。 吸取处理好的样品20μL，注入高效液相色谱仪，进行HPLC分析，同时进行标准溶液的分析，将样品的峰与标准溶液峰比较，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。 四、维生素E的测定 原理：试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱C18反相柱分离维生素E，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。 1. 色谱条件(参考条件)： 预柱：ultrasphere ODS lOμm，4mm×4.5cm；分析柱：ultrasphere ODS 5μm，4.6mm×25cm；流动相：甲醇+水(98+2)混匀，临用前脱气；紫外检测器波长300nm，量程0.02；进样量20μL；流速1.7mL/min。 2. 试样分析 取试样浓缩液20μL，待绘制出色谱图及色谱参数后， 用标准物色谱峰的保留时间定性。 第三节 水溶性维生素的测定 一、维生素B1（硫胺素）的测定 二、维生素B2 的测定 三、维生素C的测定 一、维生素B1（硫胺素）的测定 （一）原理：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线照射下发出荧光。没有其他物质干扰时，此荧光相对强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。 （二）测定：依次对样品进行提取和净化。 荧光测定条件：激发波长365nm，发射波长435nm；激发波狭缝5nm，发射波狭缝5nm。 依次测定下列荧光强度：① 试样空白荧光强度(试样反应瓶A)；② 标准空白荧光强度(标准反应瓶A)；③试样荧光强度(试样反应瓶B)；④ 标准荧光强度(标准反应瓶B)。 结果按公式计算 二、维生素B2 的测定 （一）原理：核黄素在440～500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光相对强度与核黄素的浓度成正比。在波长525nm下测定其荧光相对强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S204)，将核黄素还原为无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。 （二）测定：样品制备；核黄素吸附柱；过柱与洗脱；标准曲线制备。 于激发光波长440nm，发射光波长525nm，测量试样管及标准管的荧光值。待试样及标准的荧光值测量后，在各管的剩余液(约5mL～7mL)