酶学与酶工程第三酶的生物合成学生.pptVIP

1、体积比微生物大； 2、对剪切力敏感； 3、生长和代谢速率低，生长倍增时间和发酵周期长； 4、动物细胞营养要求复杂； 5、发酵产物不同 1、植物细胞发酵技术和特点： 植物细胞发酵技术 发酵特点（与直接提取分离相比较而言）： （1）提高产率； （2）缩短周期; （3）易于管理、减轻劳动强度； （4）提高质量。 2、植物细胞发酵技术 (I)高产细胞系的选择： 主要有以下几个途径：材料选择，克隆选择，抗性选择，诱变选择,细胞工程和基因工程选择； (II)影响产物产量的因素： 材料来源,培养基成分，光照和温度，pH，细胞形态分化程度等; (III)提高产物产量的途径： 选择高产细胞系，控制细胞生长和分化程度，加入诱导物或前体，两相培养和产物释放，毛壮根培养技术。 (IV)植物细胞培养系统专用的生物反应器。 2、植物细胞发酵产酶的工艺条件控制 （1）植物细胞生长和发酵所使用的培养基： 大量无机盐、维生素和植物激素、无机氮源、碳源（蔗糖） MS培养基和B5培养基 （2）温度和pH值 （3）通风与搅拌 （4）光照的控制 （5）前体的添加 （6）刺激剂的应用 1、动物细胞可以生产多种具有较高价值的药物，特别是疫苗、激素、单克隆抗体和酶等。 由动物细胞培养生产的酶有胶原酶，血纤蛋白溶酶原活性剂等。 2、动物细胞培养方法： 悬浮培养；固定化细胞培养 3、动物细胞发酵工艺条件的控制 又称固定化活细胞、固定化增殖细胞用各种方法固定在载体上又能进行生长、繁殖和新陈代谢的细胞。是70年代后期(1978)发展起来的技术; 在发酵生产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等胞外酶方面取得了成功。 固定化细胞： 1、提高产酶率：细胞密度增大 生化反应加速 产酶率提高 2、可在高稀释度下连续发酵：D不影响固定化细胞; 3、基因工程菌的质粒稳定，不易丢失； 4、发酵稳定性好：细胞受载体保护，pH和T适应性宽； 5、缩短发酵周期，提高设备利用率； 6、产品容易分离纯化； 7、适于胞外酶等胞外产物的生产。 与游离细胞发酵大同小异，需特别注意的几个问题： 1、固定化细胞的预培养 先预培养，使固定在载体上的细胞生长繁殖，长好后，再用于发酵产酶，其培养基和工艺条件可以相同或不同。 2、溶解氧的供给 由于受到载体的影响，使氧的供给成为主要的限制性因素。 解决办法： （1）加大通气量（强烈搅拌会破坏固定化细胞）； （2）改变固定化载体，如少用琼脂等对氧扩散不利的载体； （3）过氧化氢酶与细胞共固定化，培养基加入适量的H2O2； （4）降低培养基的浓度，以降低培养基的粘度。 3、温度的控制 连续发酵时，由于D较高，反应器内温度变化较大，先预调流加液温度。 4、培养基成份的控制 某些固定化载体的结构会受到某些成份的影响，如过量的磷酸盐会破坏海澡酸钙凝胶制备的固定化细胞。 原生质体是除去细胞壁后由细胞膜及胞内物质组成的微球体。 由于原生质体不稳定，通过凝胶包埋法可使之稳定性提高； 可使原来胞内产物分泌到细胞外。 1、变胞内产物为胞外产物； 2、提高产酶率； 3、稳定性较好； 4、易于分离纯化。 二、固定化原生质体发酵产酶的工艺条件及其控制 （1）渗透压的控制； （2）防止细胞壁的再生； （3）保证原生质体的浓度。 培养基的设计原则： 适宜的营养物质 营养物质的浓度与配比合适 物理、化学条件合适 经济节约 精心设计，试验比较 1）培养基的组分 碳源 凡能提供细胞营养所需的碳元素(碳架)的营养源，称为碳源(carbon source)。细胞中碳元素含量相当高，一般占干物质的50％左右，因此碳源是工业发酵中使用的主要原料之一。 原料的供应和价格 最常用的碳原为淀粉水解物 氮源 凡能提供细胞生长繁殖所需氮元素的营养源，称为氮源。氮源主要功能是构成细胞的蛋白质、核酸以及含氮代谢产物；同时，当培养基中碳源不足时，可作为补充碳源。 氮源可分为有机氮源和无机氮源两种。 有机氮源 无机氮源 培养基中碳和氮两者的比例对酶的产量有显著的影响。C/N 无机盐和微量元素 无机盐的主要作用是提供细胞生命活动不可缺少的无机元素，并对培养基的pH、氧化还原电位和渗透压起调节作用。各种无机元素的功用各不相同， 细胞的主要组分 酶的激活剂或抑制剂 对培养基的pH、渗透压、氧化还原电位起调节作用 大量元素和微量元素 生长因子 生长因子(growth factor)是一类对细胞正常代谢必不可少且不能用简单的碳源和氮源自行合成的有机物。它的需要量一般很少。广义的生长因子除了维生素外，还包括各种氨基酸、嘌呤、嘧啶、以及动植物生长的激素等。 水： 水是微生物最基本的成分（70%-90%） 水是微生物吸收营养物质、排泄代谢物的溶剂 水细胞成分，直接参与代谢活动 调节细胞环境的温度