第8讲植物组织器培养生产代谢产物2.pptVIP

第8讲 植物组织器官培养 制备代谢产物 一 本节主要内容 毛状根培养制备次级代谢产物 二 本节关键问题 1.毛状根的诱导机制与方法、应用 2.毛状根培养制备次级代谢产物的影响因素 3.植物组织器官、细胞培养制备次级代谢产物的 各自优缺点 一 分化与次级代谢产物关系 1 1.细胞分化与次生代谢产物 细胞分化程度的提高与次生代谢产物含量 有一定的相关性。例如： 许多植物次生代谢产物的合成与叶绿体的 分化有关。 2.细胞聚集和组织水平上的分化 在聚集的细胞团块中，位于表面和中央的 细胞处于不同的分化状态，从而常表现出 与游离细胞不同的次生代谢能力。 例如：小果咖啡培养物中嘌呤环生物碱的 合成取决于细胞团块的大小。因此，固定 化培养利于提高生产次生代谢产物含量。 3.器官水平上的分化 有些植物的某种次生代谢产物在某个器官中含量 较高，在悬浮培养细胞中含量较低或没有。 例如：柴胡根中含有效成分柴胡皂苷，其愈伤组 织一般不能合成这类化合物。 有些植物的培养物在合成次级代谢产物时要求有 芽的形成。 例如：长春花的脱分化培养细胞中很难获得具有 抗癌活性的长春花碱，而在培养的长春花簇芽中 能测定出长春花碱。 大多数植物次级代谢产物与细胞分化有关。 离体培养的植物细胞存在不稳定、目标产物含量 低、需要激素等不足。 因此，分化程度较高、遗传更稳定的植物组织器 官培养在有价值次级代谢产物生产上展现了应用 潜力。 二 植物组织器官培养 生产次级代谢产物 （一）毛状根培养生产次级代谢产物 一些植物的次级代谢产物在根里大量合成 ，但是正常根的培养非常困难，生长缓慢 ，收获困难。 毛状根(hairy roots)是发根农杆菌（ Agrobacterium rhizogenes）感染双子叶 植物后，形成的类似头发一样的根组织。 许多植物的毛状根在离体培养条件下表现 出次生代谢产物的合成能力，产物产量较 正常植物及悬浮培养细胞的要高。 1.毛状根产生机制 发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes)是一种革兰氏阴性菌，能 侵染大多数的双子叶植物、少数单子叶 植物及个别的裸子植物，诱发被感染植 物的受伤部位长出毛状根。 发根农杆菌具有致根性，是因为它具有 能诱导毛状根产生的Ri(Root ）, inducing)质粒（约250kb的大质粒） 是位于发根农杆菌染色体之外的独立的 双链环状DNA。具有2个主要的功能区： T-DNA区(Transferred DNA region， 转移区)和Vir区(Virulanee region， 致病区)。 在通常状态下，Ri质粒上Vir区的基因处于抑制 状态，当发根农杆菌感染寄主植物时，受损伤 的植物细胞合成的低分子苯酚化合物乙酰丁香 酮使Vir区处于抑制状态的基因被激活，产生一 系列限制性核酸内切酶，在酶的切割作用下产 生T-DNA链，T-DNA进入植物细胞核内，整合进 植物细胞的基因组。其整合和表达的结果导致 了大量毛状根的产生。 T-DNA上有生长素合成基因tms 1和tms 2，指导 IAA(吲哚乙酸)的合成，因此转化产生的毛状根 ，在培养时不需要添加外源生长激素，为激素 自养型。 2.毛状根诱导方法 （1）外植体接种法 取植物的叶片、茎段、叶柄等无菌外植体，与发 根农杆菌共同培养2～3 天，将植物的外植体移到 含有抗生素的选择培养基上进行培养，经过多次 继代培养，转化的植物细胞产生愈伤组织，并可 产生毛状根。 （2）茎杆接种法 无菌植株生长到一定时候，将植株的茎尖、叶片 切去，剩下茎杆和根部，在茎杆上划出伤口，将 带Ri质粒的发根农杆菌接种在伤口处和茎的顶部 切口处，经过一段时间培养，在接种部位产生毛 状根。 （3）原生质体—农杆菌共培养法 将原生质体培养3-5天后，加入带Ri质粒的发根农 杆菌进行共培养，然后借助于转化后的细胞激素 自养型特性或T-DNA上的抗菌素标记筛选出转化成 功的细胞。 分裂形成愈伤组织，在无激素培养基上可产生毛 状根。 3.毛状根培养优点 由Ri质粒转化的毛状根生长快、激素自养型、生 长周期短，在培养时不需要添加外源激素，易于 培养。 毛状根分化程度高，产生次级代谢产物能力强， 合成较为稳定，能大量合成某些悬浮培养的细胞 不能或者很少合成的次级代谢产物。 通过T-DNA改造，易于采用基因工程途径提高次级 代谢产物产量。 4.毛状根在药用次生代谢产物中的应用 毛状根应用于药用植物次生代谢产物的生产已有 近30年的历史。 黄酮类(flavonoids)：付春祥等的研究表明。来 源于新疆雪莲根段外植体的毛状根系。其20d的 生长速率可达到鲜重接种量的24倍。其中黄酮含 量是野生雪莲根的8.6倍，是野生雪莲叶片的2.9 倍。 生物碱类(alkaloi