(-)-棉酚对滑膜肉瘤细胞增殖与凋亡的影响及其机制的研究-外科学专业论文.docxVIP

新疆医科大 新疆医科大学硕士学位论文 （－）-棉酚对滑膜肉瘤细胞增殖与凋亡的影响 及其机制的研究 研究生：张顺利 指导教师: 锡林宝勒日 副教授 摘 要 目的：探讨（－）-棉酚对人滑膜肉瘤 SW-982 细胞体外增殖和凋亡的影响及其 可能的作用机制。方法:M TT 法检测（－）-棉酚对 SW-982 细胞的增殖抑制作用； Wright-Giemsa 染色、Hoechst33258 荧光染色及透射电镜观察（－）-棉酚作用后 SW-982 细胞形态的变化；流式细胞仪观察（－）-棉酚对细胞周期的调控作用和细胞 凋亡率的影响；Western blot 方法分析（－）-棉酚对细胞凋亡相关蛋白 Bcl-2，Bax 表达水平的影响；比色法研究（－）-棉酚对 Caspase-9 和 Caspase-3 活性的影响。结 果：（－）-棉酚对人滑膜肉瘤株 SW-982 具有生长增殖抑制作用，并且这种作用呈时 间、剂量依赖效应。随着（－）-棉酚浓度的增加和作用时间的延长，其对细胞增殖 的抑制作用明显增强。Wright-Giemsa 染色光学显微镜下、Hoechst33258 染色荧光显 微镜下及透射电镜镜下均可见经 4.0μmol/L 的（－）-棉酚作用 24h 后 SW-982 细胞 出现凋亡的特征性形态学改变。经（－）-棉酚作用 24h 后，随着浓度的增加，SW-982 细胞中 G0/G1 期细胞数比例增加，而 G2/M 期、S 期细胞数比例均有不同程度减少， 细胞被阻滞于 G0/G1 期，表明（－）-棉酚对 SW-982 细胞具有细胞周期调控作用， Annexin V/PI 双染法流式细胞仪测得细胞早期凋亡率也同（－）-棉酚浓度呈正相关 关系。经（－）-棉酚作用 24h 后， SW-982 细胞中的凋亡相关蛋白 Bcl-2 的表达与 （－）-棉酚浓度呈负相关关系，而 Bax 蛋白的表达与（－）-棉酚浓度呈正相关关系。 4.0μmol/L 的（－）-棉酚作用不同时间后出现了 Caspase-9、Caspase-3 活性的变化。 作用 12h 时，Caspase-9 活性达到高峰，随后活性呈下降趋势，作用 18h 时 Caspase-3 活性达到高峰，随后活性呈下降趋势。结论：本研究证实（－）-棉酚对人滑膜肉瘤 株 SW-982 具有抑制增殖和诱导凋亡的作用，其作用机制可能与 Bcl-2 蛋白表达水平 下调，Bax 蛋白表达水平上调，Caspase-9、Caspase-3 活性的激活有关，（－）-棉酚 诱导 SW-982 细胞凋亡是由线粒体依赖性细胞凋亡途径完成的。 关键词：滑膜肉瘤；（－）-棉酚；凋亡；细胞周期；Bcl-2；Bax；Caspase-9；Caspase-3 １ Study on mechanism and effect of apoptosis and Proliferation by (–)-gossypol on human synovial sarcoma cells Postgraduate: Zhang Shunli Supervisor: Xilinbaoleri ABSTRACT Object:To study the eftectsofmanrunycin on proliferation and apoptosis of human synovial sarcoma SW-982 cells and elucidate the possible mechanisms. Methods:MTT colorimetric assay was applied to detect the antiproliferation of (–)-gossypol in synovial sarcoma SW-982 cells; Morphological changes in the nuclear chromatin of cells undergoing apoptosis. were determined by Wright-Giemsa staining, Hoechst33258 staining and transmission electron microscopy detection; Flow cytometric assay was performed to evaluate the cell cycle and apoptosis by staining with PI as well as Annexin V/PI; The influence of (–)-gossypol to the expression of apoptosis-associated proteinBcl-2 and Bax w