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加压毛细管电色谱仪的原理及应用 Capillary ElectrochromatographyAdvances and Applications 分子生物研究中心 主讲人:李少伟 CEC基本原理 1微型分离技术 2micro-HPLC 和 CE的结合 3电渗流 (EOF) 为流动向的推动力 4二维分离机理：液相色谱和电泳之和（分配和电泳淌度） TriSepTM-2100加压毛细管电色谱仪操作流程 准备工作： 样品：过滤（0.45或0.22μm滤膜） 流动相：过滤（0.45或0.22μm滤膜），脱气, (注意：超声脱气时，水太热了要换) 仪器 主要包括四个模块：流体输送单元（Solvent Delivery Module）；微流控制单元（Micro Flow Control Module）；高压电源（High Voltage Module）；检测器（Detection Module）和数据采集软件。各部分分别开关、设置工作参数和程序。 使用温度10-35℃，相对湿度不大于75%。 可以进行毛细管微柱色谱、毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、毛细管电泳分析。 各单元参数设置及操作 1．溶剂输送单元 1．1 参数设置：反复按 FUNC/BACK 键至显示所要设置的参数，按数字键输入后，ENTER 确认；设置下一参数，主要参数设置完成，按CE 回到初始画面。常用参数包括流速FLOW（正常流速为0.02-0.05mL/min, 如果在这个流速范围内进样量太大，就增加流速；反之就减小流速）、最高、最低限压P.MAX/P.MIN等（最低限压建议设置大于0的数值，否则漏夜、进气保护功能不能发挥作用） 1．2 输液方式 1．2．1 单泵恒比例送液：使用两个溶剂输送单元中的一个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按PUMP开始输液 1．2．2 双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂输送单元上分别设置流速，输送需要混合的A、B两种溶剂；另一种方法是设置主泵和从泵：FUNC/BACK 滚动至SYS 项，将主泵设为2，（从泵此项为1），此时主泵面板上的G.E.灯亮，在主泵面板上设置两种溶剂的比例CONC和总流速FLOW后，按主泵PUMP开始送液（注意，辅泵的流速是总流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于0.005mL/min, 否则辅泵流速不稳，影响梯度基线） 1．2．3 编辑梯度送液程序：在主泵上设置流速FLOW、基本输液比例CONC，编辑时间程序： EDIT 进入编辑状态，输入时间数值，滚动FUNC/BACK 到BCNC输入B相的梯度比例数值，按ENTER确认。常用的参数如BCNC（A、B液比例）、FLOW（流速）、STOP（停止程序）…等。程序编好后，反复按ENTER查看，按DEL清除错误的程序步。按主泵RUN键运行时间程序, 关掉RUN键，泵按梯度初始化条件走。 确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中溶质不会析出结晶！ 1．3 系统排气或快速更换溶剂系统  把泵的吸滤头放进已经过滤并除气后的流动相中，加电时出口缓冲瓶中也装满相同的缓冲溶液。将Drain阀向OPEN方向（逆时针）旋转180度，按Purge键，约3分钟后自动停止， 也可自己调整Purge 时间，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。Close Drain阀。把流速调成1ml/min，把四通处连接反压阀的peek螺丝松开，十分钟后再把流速调成0.05ml/min, 把反压阀的peek螺丝拧紧。 2．紫外-可见检测器开启电源后，经过短暂的时间，氘灯点亮，波长显示为254 nm。(不一定是254nm，而是上次关机时使用的波长)，按FUNC/BACK键到改波长处，输入实验需要的波长值， ENTER确认，检测器一般30-60min的预热，然后按ZERO基线调零后，基线稳定后，可以进样。 注意：开色谱软件前要把微流控单元的开关打开。否则软件打不开。 3．高压电源输出电压：0-30kV；电流：0-100μA；最大功率：1W注意：当设置10kV以上电压时，应设置较长升压时间（如10秒），突然升压可导致破坏性后果；当环境潮湿时，不要设置超过10kV的电压。3．1 开机后，按MENU ，以上下箭头选择分析模式：电色谱 CEC 或电泳CE，ENTER确认 3．2 以上下左右箭头输入电压（最小单位100V）、升压时间和电场方向+/-，ENTER确认。确认检测器和微流控制单元仓门关闭、背板电缆连接正确，按RUN 执行注意，改变电压输出极性时，还要改变后面板高压线的插孔位置，设置输出为正电压时，后面板高压线插在“HV+”孔，设置输出为负电压时，后面板高压线插在“HV-”孔，地线始终接在“HV0”孔不变；设置好输出电压极性，按E