Sox10在肿瘤增殖和转移中的作用及机制免疫学专业论文.docxVIP

目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 引 言1 HYPERLINK \l _bookmark1 第一部分 重组人 SOX10 基因病毒载体构建、包装及感染宿主细胞 3 HYPERLINK \l _bookmark2 1. 材料与方法3 HYPERLINK \l _bookmark3 2. 实验结果14 HYPERLINK \l _bookmark4 3. 讨论16 HYPERLINK \l _bookmark5 第二部分 SOX10 基因对肿瘤细胞增殖和 转移的抑制作用 18 HYPERLINK \l _bookmark6 1 材料与方法18 HYPERLINK \l _bookmark7 2 实验结果：22 HYPERLINK \l _bookmark8 3 讨论28 HYPERLINK \l _bookmark9 第三部分 Sox10 基因抑癌作用机制的初步研究 31 HYPERLINK \l _bookmark10 1 材料与方法31 HYPERLINK \l _bookmark11 2 结果34 HYPERLINK \l _bookmark12 3 讨论：36 HYPERLINK \l _bookmark13 结 论38 HYPERLINK \l _bookmark14 参考文献39 HYPERLINK \l _bookmark15 综 述42 HYPERLINK \l _bookmark16 攻读学位期间发表和待发表的论文57 HYPERLINK \l _bookmark17 缩略词表58 HYPERLINK \l _bookmark18 致 谢59 So Sox10 在肿瘤增殖转移中的作用及机制 引 言 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 引 言 恶性肿瘤最重要的生物学特性是侵袭和转移,这也是肿瘤病人的主要临床致死原 因。据不完全统计,约 70%的肿瘤病人在临床确诊时已经存在肿瘤转移。尤其是死亡 率占前几位的肿瘤,如肺癌,结直肠癌,肝癌等,临床病人确诊时,往往已经处于中晚期,通 常肿瘤一旦发生转移,常规临床治疗效果不佳,死亡率极高[1]，因此,积极寻找肿瘤转移 的机制及治疗方法是提高肿瘤治疗水平的关键。肿瘤患者分子水平的转移早于临床可 检测水平的转移[2]。分子水平的研究已经在晚期转移性肿瘤的预后判断及治疗中取得 了一定的成果，如 K-ras 基因突变的患者预后较差，抗-EGFR 抗体治疗可以改善此类 患者的预后已经基本成为共识，但有的研究也对此提出了质疑。因此，寻找更多的或 多个基因组成的可综合预测肿瘤转移、预后及指导治疗的分子标志物具有重要意义。 表观遗传学是指可遗传的非 DNA 序列改变引起的基因表达的变化,通过控制基因 的表达时间、空间位置和表达方式来调控发育过程及各种生理反应，并且在肿瘤的发 生、发展中发挥了重要作用。DNA 甲基化异常是肿瘤中最常见的表观遗传学改变之 一，肿瘤相关基因的异常甲基化在肿瘤的发生及发展中发挥重要作用，这种改变在消 化道肿瘤中的作用更明显。结直肠癌是遗传学水平癌变机制研究较为明确的肿瘤之 一，也极有可能是异常甲基化研究的有力模型。已有研究显示结直肠癌中存在多个基 因甲基化异常，基因异常甲基化可能在结直肠癌的诊断、预后评估及治疗中发挥重要 作用。因此，研究结直肠癌中异常甲基化的基因及其机制对结直肠癌的诊治具有重要 意义，本文选取了包括结直肠癌细胞系 HCT116 在内的三种细胞进行了深入研究和讨 论。 癌细胞在整体基因低甲基化的水平下，一些局部特定区域发生高甲基化，而这种 特定区域一般是跨越管家基因及肿瘤抑制基因启动子区的 CpG 岛区。这种 CpG 岛高 甲基化在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用，也是肿瘤发生发展中基因表达沉默的主 要机制，尤其表现在肿瘤抑制基因和错配修复基因的失活上[3]。我们通过甲基化芯片 发现在肿瘤细胞系中广泛存在 Sox10 启动子区的高甲基化。进而我们通过甲基化特异 性 PCR (Methylation-specific PCR MSP)及 RT-PCR 验证，发现在人肿瘤细胞系及肿瘤 组织中广泛存在 Sox10 启动子区的甲基化，伴随着 Sox10 表达水平降低或缺失，而在 引 言 Sox10 在肿瘤增殖转移中的作用及机制 大多数人正常组织标本中很少存在启动子区的甲基化，除胎盘外 Sox10 均有较高程度 的表达。因此，我们推断 Sox10 很有可能是一个新的抑癌基因。 Sox 家族是一类 SRY ( sex determination region of Ychomosome ) 相关基因构成 的基因家族，编码一系列 Sox( SRY - related HM