第十三周周三化学实验8纸层析-20130519.pptVIP

* 纸层析 实验目的 1了解纸层析的基本原理 2 掌握纸层析的基本操作技术 实验原理 纸层析：滤纸作为载体；固定相为纸纤维上吸附的水 分；流动相为与水不相混溶的有机溶剂。 把试样点在滤纸的原点位置上，当流动相溶 剂在滤纸的毛细管作用下，连续不断地沿着 滤纸前进通过原点时，试样中各组分便随着 流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相 溶剂之间连续发生一次又一次的分配。 色谱法(Chromatography) ：混合物中各组分在流动相与固定相间的分配比不同而使之分离 结果，分配比较大的物质移动速度较快，移动的距离较远；分配比较小的物质移动速度慢，移动的距离较近。这样，便把试样中各组分分开聚集在滤纸的不同位置上。这种分离过程叫展开。因此，流动相溶剂又叫做展开剂。 当分离的物质是有色的，如甲基橙，层析后在滤纸上可以直接看出它的色斑。当分离的是无色的物质，如氨基酸，就必须用显色剂使之显色。无色的氨基酸可以用茚三酮使之显红色，所用的茚三酮就是显色剂。 A B A+B 样品经层析展开后，被分离的各化合物可通过它的Rf值（比移值）来鉴定。 l m n A B A+B Rf值随各化合物的结构、滤纸的种类、展开剂、温度的不同而异。但在上述条件固定的情况下，对于某一化合物来说， Rf值是一个常数。故Rf值可作为定性鉴定的依据。 仪器： 层析缸 层析滤纸 直尺 铅笔 毛细管 电吹风 试剂： 展开剂： 正丁醇:醋酸:乙醇:水 = 4:1:1:2 显色剂: 1%茚三酮丙酮溶液 样品: 丙氨酸(2%)乙醇溶液 丙氨酸(2%)和亮氨酸(2%)混合溶液 丙氨酸： 亮氨酸： 实验仪器与试剂 1、准备 在距滤纸一端约2cm处用铅笔轻轻划一横线作起点线，并在横线上标上A、B两点。 注意：A、B两点不要太靠近滤纸边缘，以免产生边缘效应。在准备过程中手不要接触滤纸中部。 A B 实验步骤 2、点样 用毛细管吸取已准备好的样品，毛细管垂直于纸面在标有A、B记号处，分别点两个样品，其中一个是丙氨酸样品，另一个是丙氨酸和亮氨酸的混合液。风干，按上述方法重复一次。 注意：点的样直径不超过3mm，动作要轻，点一个样风干后再点另一个样。 A B 4、显色 用装有显色剂溶液的喷雾器，在滤纸已展开部分均匀喷上茚三酮溶液，然后用电吹风吹干溶剂，再用热风吹滤纸条，直至滤纸条上有紫红色斑点出现。 5、结果处理 找出滤纸条上有几个斑点，并能辨认出各个斑点是由哪一个氨基酸显现的。用铅笔划出斑点的轮廓，标出斑点的中心，最后分别计算丙氨酸和亮氨酸的Rf值。 2 + （-H3O+） + RCHO + CO2 紫红色 实验数据 Rf = 原点至层析斑点中心的距离 原点至展开剂前沿的距离 计算 Rf 测 = ？ n m l 3、展开 将已点样的滤纸垂直挂于带有小钩的层析缸盖上，使滤纸下端浸入展开剂中。当展开剂的前沿位置达到距滤纸上端约1?2cm处时，小心取出滤纸趁湿用铅笔划出展开剂前沿位置，然后用电吹风吹干。 注意：展开剂不要淹没滤纸上起点线，在起点线下1cm左右；起点线应与展开剂液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时层析缸封闭。 注意事项 实验过程中手不要接触滤纸中部。 实验成败决定于点样的好坏，要求点的样直径不超过3mm。 展开剂不要淹没滤纸上起点线；起点线应与展开剂液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时层析缸封闭。 分别计算丙氨酸和亮氨酸的Rf值 每人单独操作，样品层析滤纸附在实验报告上。 1、Rf值的意义是什么？哪些因素会影响Rf值？ 2、在纸层析时，层析缸为什么要求尽量封闭？ 思考题 1 丙氨酸 2 混合液 终点线 起点线 2cm A B * * *