高效液相色谱HLC-1.pptVIP

高效液相色谱HPLC;目录;色谱是什么？;我们都有用纸层析法分离叶绿素的经历。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。;薄层色谱;色谱法的分离原理;高效液相色谱法;高效液相色谱HPLC——特点;按分离机制分类;液-固色谱法LIQUID-SOLID ADSORPTION CHROMATOGRAPHY;液-液分配色谱LIQUID- LIQUID PARTITION CHROMATOGRAPHY;离子交换色谱ION-EXCHANGE CHROMATOGRAPHY;离子对色谱ION PAIR CHROMATOGRAPHY;排阻色谱色谱SIZE-EXCLUSION CHROMATOGRAPHY;死体积（dead Volume）Vm，指色谱柱在填装后柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和。死体积本意是指色谱柱中未被固定相占据的空隙体积，也即色谱柱内流动相的体积。但在实际测量时，它包括了柱外死体积（色谱仪中的管路和连接头间的空间以及进样系统和检测器的空间）。当柱外体积很小时，可以忽略不计。;原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。;高效液相色谱的应用;医药研究;医药应用举例——巴比妥类药物;食品分析;食品分析举例——蜂王浆;环境污染;环境污染应用举例——农药残留;精细化工;精细化工应用举例——聚合物;课本中的应用实例;一、头孢克洛的HPLC测定法; 色谱条件和系统适应性实验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钾-乙腈溶液为流动相；流速为1ml/min;波长检测为254nm。精取头孢克洛对照品和头孢克洛δ-3-异构体对照品适量，加流动相溶解并制成每1ml中分别含有头孢克洛及头孢克洛δ-3-异构体约0.2mg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢克洛及头孢克洛δ-3-异构体的分离度应符合要求。理论板数按头孢克洛峰计算不低于1500.;测定法： 1.取本品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记???色谱图。 　2.另取头孢克洛对照品适量，同法测定。 　3.按外标法以峰面积计算出供试品中头孢克洛的含量。规定按无水物计算，含头孢克洛不得少于95%。;二、血清中阿司匹林和水杨酸的 高效液相色谱测定法; 色谱条件 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶（5μm），色谱柱4. 6mm×150mm；流动相为甲醇-水-正丁醇-磷酸( 300：200: 10:0.05)；检测波长为237nrn；内标物为苯甲酸；柱温为室温。 内标溶液 苯甲酸的甲醇溶液，浓度为0.1 mg／ml。 对照品溶液的制备 精密称取ASA和SA对照品适量，加甲醇溶解并制成浓度分别为o．5㎎／ml和o．1㎎／ml的溶液。; 血清样品的处理与线性关系 取血清100μl，置离心管中，加入30%高氯酸溶液50μl与不同浓度的ASA和SA对照品溶液及内标溶液适量，使浓度均为10mg／ml。涡旋混合2分钟，离心5分锋，取上清液20μl进样。;课本中的其他例子;推荐网站