油茶花蜜期不同饲喂条件对蜜蜂体内乙酰胆碱酯酶活性影响.docVIP

油茶花蜜期不同饲喂条件对蜜蜂体内乙酰胆碱酯酶活性影响 　　摘要：分析油茶花期不同饲喂条件对蜜蜂体内乙酰胆碱酯酶活性的影响，以探讨蜜蜂油茶花蜜中毒的原因。采用糖浓度为35%的糖水饲喂西方蜜蜂蜂群，试验组采用柠檬酸分别将糖水的pH值调整为3.5、4.5，对照组不添加柠檬酸。观察并记录不同饲喂条件下的蜂群群势和烂子情况，测定蜜蜂体内乙酰胆碱酯酶的活性。结果表明，当pH值为3.5时，蜜蜂烂子情况轻微，蜜蜂体内乙酰胆碱酯酶的比活力随喂食时间的增长呈明显升高趋势，比活力差异显著（P0.05），烂子情况比其他2组严重。饲料中添加柠檬酸喂食蜜蜂后，柠檬酸与蜜蜂采食的油茶花蜜中的生物碱结合，从而释放乙酰胆碱酯酶，使乙酰胆碱酯酶活性升高。 　　关键词：油茶花蜜；蜜蜂烂子；乙酰胆碱酯酶 　　中图分类号： S896.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）06-0358-03 　　收稿日期：2015-05-11 　　基金项目：云南省科技厅重点新产品开发计划（编号：2011BB012）；国家蜂产业技术体系专项（编号：CARS-45-SYZ 17）；云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所青年创新基金（编号：QC2015005）。 　　作者简介：张燕新（1987―），女，云南曲靖人，硕士研究生，主要从事蜂产品质量与安全研究。E-mail：dreamfly0517@。 　　通信作者：王艳辉，副研究员，主要从事蚕桑蜜蜂资源利用研究。E-mail：wyh686686@。油茶（Camellia oleifera Abel.）别称茶籽树、茶油树、白花树等，属山茶科山茶属，为常绿灌木或小乔木，是我国重要的木本油料植物，与油橄榄、油棕、椰子并称为世界四大木本油料植物，被誉为“东方橄榄油”[1]。油茶花花期长、流蜜量大，是很好的蜜源植物。但油茶具有自花不育性，虽然树大花多但结果很少，有“千花一果”之称，亟需传粉蜜蜂授粉。开发利用油茶蜜源[2]不仅可增加养蜂户的收入，还能大幅提高茶籽的产量和出油率[3]。由于油茶花蜜中含有对蜜蜂具有毒性的物质，蜜蜂采食后出现腹部膨胀、丧失飞翔能力等症状，成蜂在地面上爬行，幼虫中毒后死亡腐烂，出现蜂群群势下降等现象[4]。对于蜜蜂油茶花蜜中毒现象，康雪冬等研究认为，油茶花蜜中含半乳糖的寡糖成分，棉子糖和水苏糖是引起蜜蜂中毒的主要因素，可能是蜜蜂不能利用寡糖中的半乳糖而造成消化、代谢上的障碍所致[5]。棉子糖和水苏糖中均结合有半乳糖成分，因此认为半乳糖是油茶花蜜中导致蜜蜂中毒的物质。黄坚研究认为，茶花引起蜜蜂中毒是由于茶树花蜜、油茶花蜜中均含有较高浓度生物碱等不易消化的物质[6]。蜜蜂幼虫食后不易消化，后肠阻塞造成营养不良而死亡。生物碱不仅会造成蜜蜂消化障碍，还是一种乙酰胆碱酯酶抑制剂[7-9]。乙酰胆碱酯酶是昆虫神经系统中最重要的酶系之一[10]，在中枢及外周神经系统中与乙酰胆碱受体共同参与完成神经-神经、神经-肌肉突触之间动作电位的传递。乙酰胆碱酯酶的主要生理功能是催化水解阳离子性神经递质乙酰胆碱，维持神经冲动正常传递[11]。油茶花蜜中的生物碱可能影响了蜜蜂神经系统中的乙酰胆碱酯酶，导致神经信号传递阻断而致使昆虫死亡。根据蜂农多年的养蜂经验，酸饲料可中和茶花蜜中的生物碱，并能促进蜜蜂消化，是其常用的方法，包括柠檬酸、醋酸等。本试验采用喂食柠檬酸的方法，测定蜜蜂体内乙酰胆碱酯酶的活性，以探讨蜜蜂油茶花蜜中毒的现象，以期为油茶花蜜生物碱的进一步开发提供依据，并有望将其作为新型乙酰胆碱酯酶抑制剂。 　　1材料与方法 　　1.1供试虫源 　　采用浓度为35%且pH值分别为3.5、4.5、7.0的糖水喂食西方蜜蜂，每个梯度3群，共9群。白天蜜蜂正常采集油茶花蜜粉，隔天晚上饲喂1次，饲喂量为每群800 mL，连续饲喂4周。第1次测定蜂群群势后，每周记录蜂群的成蜂量（脾）、封盖子数（包括健康和不健康封盖子）、烂子数。每群蜜蜂取样3只进行试验。 　　1.2试验地点 　　试验于西双版纳地区普文蜂场进行，普文镇位于东经101°23′、北纬22°33′，地处云南省西双版纳地区景洪市最北部。该地区最高海拔1 797.3 m、最低海拔772 m、年平均气温20.2 ℃、年平均降水量1 675.6 mm、全年日照时数1 990 h，属于北亚热带高原季风气候，适宜茶叶、咖啡、水果等植物的生长。 　　1.3主要试剂和仪器 　　主要试剂为1 mg/mL牛血清白蛋白标准品（Albumin bovine serum，云科生物工程公司），考马斯亮蓝G-250（北京索莱宝科技有限公司），1.6 mmol/L碘化硫代乙酰胆碱（Acetylthiocholine iodide，ATChI，ACROS ORGANICS公司），5，5′-二硫代双硝