绿色荧光蛋白（GFP）的转化表达与免疫印迹检测.pptVIP

绿色荧光蛋白（GFP）的转化表达及免疫印迹检测 绿色荧光蛋白（GFP） GFP 实验流程图 一、实验目的 1.熟悉转化表达的过程。 二、实验材料与用具 1、 菌种 （1） E.coli DH5α(pETH）菌株 （2）E.coli DH5α(pETH-GFP)菌株 （3）E.coli BL21菌株 （4）E.coli BL21 (pETH）菌株 （5）E.coli BL21 (pETH-GFP）菌株 三、实验原理与方法 （一）质粒的提取、酶切及琼脂糖凝胶电泳检测 碱裂解法提取质粒DNA的原理 §1、用试剂盒提取质粒DNA 酶切反应 每 20ul 酶切体系所需材料 无菌ddH2O 2ul 质粒DNA 15ul 10×Buffer 2ul EcoRI 1ul 总计 20ul 置37℃温箱酶切2hr。 酶切片断的电泳检测 制备0.8％琼脂糖凝胶板，加入适量的EB。 向酶切管里加入适量溴酚蓝，全部取出点样。 （二）感受态细胞的制备及转化 CaCl2法制备感受态细胞原理 CaCl2法制备感受态细胞操作要点 §2、氯化钙法制备感受态细胞 §3、转化 （三）GFP的诱导表达 §4、诱导表达 乳糖操纵子（Lac operon）的结构及阻遏作用 工程菌E.coli BL21(pETH-GFP)的表达原理 § 5、制备细胞裂解液 （四）聚丙烯