血液(液体样本)总RNA提取试剂盒探讨.docVIP

4 - 4 - ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒 ◆ 目录号 1123 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 使用说明 6 - 1 - RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒 目录号：1123 目录编号 包装单位 112301 20次 112302 50次 适用范围： 适用于快速提取全血（液体样本）高纯度总RNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 20次 50次 裂解液RLS 4℃避光 25 ml 50 ml 去蛋白液RE 室温 15 ml 25 ml 漂洗液RW 室温 5 ml 10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 10 ml 10 ml 70%乙醇 室温 4ml RNase-free H2O 9ml RNase-free H2O第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free吸附柱RA 室温 20个 50个 收集管（2ml） 室温 20个 50个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项： 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。裂解液RLS可以常温运输，收到后4℃避光保存。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶， 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。 独有的RLS裂解液配方，可直接裂解全血，不需要先裂解去除红细胞。 多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。 有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。 注意事项： 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 所有离心步骤如未加说明，均在室温进行。使用转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 裂解液RLS和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，用户使用前需要自备氯仿。 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。 检测OD260/OD280吸光度比值时，RNA样品应该溶于TE后检测，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。 加入裂解液RLS后，加氯仿前，样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。 关于DNA 的微量残留： 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留, 在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留（一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时： 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反