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布朗葡萄藻培养方面研究概况 　　摘要 对布朗葡萄藻培养方面的有关研究进行总结，内容涉及布朗葡萄藻常用的培养基、培养条件以及影响其生长的理化因素。重点概述和讨论了碳源、氮源、磷源、温度、光强、pH值、盐度、细菌、SC1058等理化因素对布朗葡萄藻生物量和烃产量的影响，并进一步提出获得高生物量和产烃量的可能研究方向。 　　关键词 布朗葡萄藻；培养；理化因素 　　中图分类号 Q949.25+3 文献标识码A文章编号1007-5739（2008）15-0035-04 　　 　　自发现布朗葡萄藻（Botryococcus braunii），又名丛粒藻、葡萄藻，具有高烃含量后，将该藻作为无污染可再生的替代能源生产者经若干研究者倡议引起广泛重视，美、法、日、英、澳、苏、荷和南朝鲜等国都或早或晚开展了有关研究。葡萄藻是一种单细胞绿藻，温带、热带和大陆性气候带的淡水、微咸湖水等地广为分布，在培养物中，其产烃量为生物量干重的0.3%~76.0%，通常为25%~40%，在天然样品中最高达86%，大大高于其他微生物的含烃量（几乎都低于1%），并且葡萄藻所产烃的组成和结构与石油极其相似，在一些石油沉积中几乎全部有机质都是该藻形成的[1]，故又被称为“油藻”，最可望成为工业藻种。此外，葡萄藻的培养可提高CO2的固定效率，降低生活污水的氮磷浓度，起到净化环境的作用[2]。目前，为试图得到高的生物量和产烃量，对葡萄藻的培养方面已经作了很多研究。 　　 　　1葡萄藻培养常用的培养基及条件 　　 　　最初的Chu10培养液，在组成和稀释度上，可以同富营养的湖水相比，适合多种浮游藻类生长，但生长率较慢。至20世纪80年代，用Chu13培养液成功促进了葡萄藻的生长繁殖[3]。现在改良Chu13（medified Chu13）培养基是葡萄藻培养的常用培养基。BBM培养基、BBMa培养基、BGⅡ培养基以及不同浓度（0.25X，0.5X，0.75X，1X，2X）改良Chul3培养基也适合B.braunii SAG 30.8l和LB 572的生长，但各培养基中藻的生物量和烃含量有差别，其中BGⅡ培养基中的藻体在光暗周期比16∶8，光强为1 200±200Lx，温度为（25±1）℃的培养条件下有较高的生物量（2.0g/L和2.8g/L）和产烃量（46%和33%）[4]。用Prat培养基培养葡萄藻，能获得生物量3.9kg/m3，生长世代3~4d，指数阶段生长率是0.235d-1。葡萄藻的生长速率可以进一步提高，在其盐度实验中，用SE培养基，温度23℃，光强60w/m2，光暗周期12h∶12h，盐度为0.15M的条件下培养B.braunii China1，该藻的平均倍增时间可以缩短到2.0±0.02d左右[5]。比较表明，葡萄藻能适应较广的培养基和多种培养条件，但对于不同的品系或藻株，最适合其生长的培养基成分和条件通常有差异。 　　 　　2影响葡萄藻生长的理化因子 　　 　　像其他的微藻一样，葡萄藻的生长受碳、氮、磷、温度、光强、pH值、盐度等影响。为降低倍增时间，人们对葡萄藻可能利用的碳源进行了研究，培养基中加入重碳酸盐不能缩短葡萄藻生长代时，而200mg/L的NaHCO3作为补充碳源能一定程度上促进葡萄藻生长。CO2浓度对生长有显著影响，用空气培养时，葡萄藻生长缓慢，延滞期为4d左右，第23天进入减速期，第30天进入稳定期，最小倍增时间为6d[6]；用含0.3%的CO2通气培养葡萄藻，能极大地促进其生长，最小倍增时间缩短到40h；用1%的CO2通气培养，指数阶段生物量的平均加倍时间是2d，烃产量增加了5倍[7]。可见，葡萄藻是自养的，但是通气培养以及利用合适外源碳，例如NaHCO3，能促进其生长和烃合成。对于葡萄藻化学种B，CO2通气培养有利于合成C30-C32的丛粒藻烯，碳原子数稍低于不通气培养的情况（C33-C34）。显然，在CO2通气培养条件下，从C30的丛粒藻烯甲基化合成C31，C32丛粒藻烯的速度要快于合成C33、C34以及其他更高碳原子数的同系物[7]。 　　氮是葡萄藻生长的必需营养元素。培养基中不含氮时，藻体几乎无生长，随着KNO3浓度的提高，氮的同化作用加强，生长速率增加，当硝酸钾浓度大于200mg/L时，继续增加硝酸钾浓度，生长速率增加较慢，并且过高的初始浓度，例如3kg/m3，干扰烃合成[6]。氮浓度为完整Prate培养基中的1/4时，藻体叶绿素a和叶绿素b含量比完整培养基中培养的低2.5倍，培养进行到第13天时，藻体由绿色变为黄褐色，生物量为全培养基中的1/2[8]。另有研究表明，在氮缺乏条件下，葡萄藻的干重、叶绿素a和蛋白质含量都明显下降，但类胡萝卜素和脂类增加。葡萄藻在一定程度上能利用亚硝酸盐作为唯一氮源，当其浓度为2m