小麦白粉病生防菌拟诺卡氏菌属TMG―8菌株筛选研究.docVIP

小麦白粉病生防菌拟诺卡氏菌属TMG―8菌株筛选研究 　　摘要：为更好地利用生防菌防控小麦白粉病危害，从不同省份、不同生态环境中采集52份土样，用稀释分离法得到150株菌株，通过小麦白粉孢子萌?l抑制试验、小麦离体叶片药效试验及温室苗期药效试验筛选得到1株对小麦白粉病抑制作用较强的生防菌株TMG-8。采用16S rDNA序列分析法结合部分生化测定试验对生防菌TMG-8进行初步鉴定，并采用抗生素抗性标记法测定生防菌TMG-8的定殖能力。初步鉴定菌株TMG-8为拟诺卡氏菌属；生防菌可在叶面上短暂定殖，在小麦叶片上的定殖量为下部中部上部，在小麦苗上的定殖量为根部茎部叶部；菌株 TMG-8可在土壤中短期稳定定殖，其含量随着时间逐步增加并趋于稳定，但增加幅度不大；无论是浸根处理还是灌根处理，生防菌都能在小麦苗上定殖，定殖量为根部茎部叶部，灌根处理比浸根处理含菌量多。 　　关键词：小麦白粉病；生物防治；拟诺卡氏菌属；定殖能力 　　中图分类号：S435.121.4+6 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2017）01-0095-04 　　小麦白粉病是由禾本布氏白粉菌（Blumeria graminis f. sp. tritici）引起的一种世界性病害，在世界各产麦区均有发生，是影响小麦生长发育的主要病害之一[1]。近年来，随着部分地区年降水量增多[2]、冬季温度升高[3]、耕作制度变化以及受菌种变异、品种繁杂等因素的影响[4]，我国小麦白粉病的发生与危害日趋严重，几乎蔓延至全国所有麦区，在很多地区已从次要病害上升为主要病害，成为小麦生产中发病面积大、危害损失严重的常发性病害。 　　化学防治是小麦白粉病防治的重要措施，具有防治效果好、收效快、使用方便、受季节性限制较小、适于大面积使用等优点，但近年来随着药剂防治的一些弊端如农药残留、病菌产生抗药性的出现，人们急需寻找一种安全、高效、无污染的生物农药来解决这些问题[5]。目前，利用有益微生物防治农业植物病害具有良好的应用前景。国内外一些学者在生防菌的研究和开发方面做了大量工作并取得了良好的成果。据田小卫等报道，链霉菌属次生代谢产物在质量浓度为6 000 mg/L时，对小麦白粉病的保护和治疗效果分别为76.13% 和70.78%[6]。于基成等研究测定了植物源杀菌剂对小麦白粉病的保护和治疗作用，防效分别为66.78%和73.33%，均优于其他生物药剂[7]。张晶等筛选出的放线菌DL26和PJ2对小麦白粉病抑制能力较强，病情指数与三唑酮处理差异不显著，防治效果分别达74.43%和70.01%[8]。Hajlaoui等报道Sporothrix flocculosa对小麦白粉病有一定的防治作用[9]，Timothy 等测定了S. flocculosa对小麦白粉病的防治效果，检测结果表明其与吗菌灵和硫磺对白粉菌有一样的防效[10]。美国Agraquest公司曾利用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）QST703株系生产出生物农药产品[10]。本研究报道了从山西、山东、河南、甘肃、南京、黑龙江、辽宁等省份和市区不同生态环境的52份土样中分离筛选得到的生防菌株TMG-8，明确该菌株对小麦白粉病有良好的防效，并观察其培养特征，测定部分生化特性，结合16S rDNA序列分析进行初步鉴定，同时研究了它在小麦上的定殖能力，为研制防治小麦白粉病的生防制剂打下基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　供试土壤：分别于2010―2012年，从山西、山东、河南、甘肃、南京、黑龙江、辽宁等省份和市区不同生态环境里采集土样52份。 　　供试病原菌：小麦白粉病菌由沈阳农业大学小麦病害实验室提供。 　　供试培养基：分离培养基采用马铃薯琼脂糖固体（PDA）培养基、马铃薯琼脂糖液体（PDB）培养基、牛肉膏蛋白胨固体（NA）培养基、牛肉膏蛋白胨液体（NB）培养基、高氏1号固体培养基、高氏1号液体培养基、1.5%琼脂液体培养基。 　　1.2 土壤生防菌分离与筛选 　　1.2.1 生防菌分离 采用土壤稀释分离法，制备不同浓度梯度的土壤菌悬液（10-3、10-4、10-5、10-6、10-7），依次分别接入PDA、NA和高氏1号培养基中，置于28 ℃下恒温培养3～5 d，挑取形态、颜色等培养性状不同的单菌落转接，再经划线培养、纯化后转接到相应的液体培养基中，28 ℃下130 r/min培养4～5 d，离心收集上清液。 　　1.2.2 孢子萌发抑制试验 将菌株发酵液分别与1.5%融化状态的琼脂培养基以1 ∶1混合，取500 μL滴加到载玻片上，将待测定的小麦白粉菌孢子均匀抖落到培养基上，于 18 ℃ 无光条件下培养48 h，以含1.5%琼脂的无菌水（1 ∶1）培养基上的孢子萌发率作