[医学]药代动力学实验.pptVIP

选择性沉淀 常用于生化样品中除蛋白 有机溶剂 乙腈，甲醇 强酸 三氯乙酸，过氯酸 盐 50% 硫酸铵 10% TCA 样品分析时第一步干什么? 想办法得到各种信息 向同行了解是否做过此类样品，或有否类似样品的分析方法 查文献，如CA(化学文摘) 仪器制造商的文献，如Waters 对色谱柱有足够的了解 掌握分离机理，自己开发方法 充分了解您自己的样品 分析时要了解哪方面的情况？ 灵敏度的要求有多高? 样品的本底是否很复杂? 有多少组份要分析? 对分析的精确度、准确度等有多高要求? 是否因是日常检验，而要求方法容易使用? 使用文献方法 色谱柱填料的种类、品牌是否相同? 注意文献方法的流动相 是否损害色谱柱? 如色谱填料品牌不同，需要调整流动相 注意色谱柱的规格：内径、柱长 需要调整流速、进样量 注意梯度条件 了解系统的滞后体积（梯度） 反相色谱的方法开发 开发过程实例 色谱条件∶ 色谱柱：C18，4mm×30mm 流动相：乙腈/水，不同的溶剂强度，60/40、50/50、40/60，由强渐弱 流速：2ml/min 样品： ① 对羟基苯甲酸甲酯(Methyl Paraben) ② 对羟基苯甲酸丙酯(Propyl Paraben) ③ 对羟基苯甲酸丁酯(Butyl Paraben) 改变流动相比例 谱图 改变流动相组成 通过改变流动相改变选择性 同样强度的不同溶剂 改变色谱柱 离子型化合物的分离方式 使用离子交换柱∶离子交换法 主要用于“强”阴、阳离子 使用反相柱 离子抑制色谱法 通过改变流动相的pH值，使样品成中性 离子对色谱法 加入“对离子”，使样品呈中性 离子抑制色谱 离子型化合物在反相色谱柱上不保留 改变流动相的pH值，抑制样品离子的电离 适用于弱酸性化合物的分离 降低流动相的pH值，使样品降低离子化 使用硅胶基质C18填料 使用条件应在填料基质的范围内 硅胶柱的pH在2-8（较保险值3-7）内 常用缓冲液及其pH值 离子抑制色谱实例 在乙腈/水及pH=7时，多数保留时间很短，无法完全分离。 其他精密仪器操作标准操作规程(SOP)要点 高速冷冻离心机：配平、十字交叉、样品选择 普通离心机：配平、十字交叉、样品选择 万分之一电子天平：称量量程范围、记录、保养 紫外可见光分光光度计：预热、样品量、校准 涡旋振荡器：涡旋程度 超声机：超声效果、时间 药代动力学实验室的要求 1.环境的要求：灰尘、湿度、阳光是分析仪器的大敌 2.所写即所做 3.分析测定用试剂为色谱纯及以上，水为超纯水 4.痕量分析对实验人员有较高要求 5.对仪器设备的操作严格按照SOP执行，专人管理和 维护保养 6.良好的实验习惯 HPLC-UV测定加替沙星的血药浓度如何着手？ 查文献：中国优秀期刊论文数据库、pubmed 需要关注的问题：色谱柱的选择 流动相的组成 柱温箱的温度 样品处理方法 检测器的波长 定量下限和标准曲线范围 静注加替沙星在家兔体内药代动力学如何着手？ 查文献：中国优秀期刊论文数据库、pubmed 实验设计需要考虑的问题：种属 给药剂量 取血时间 采样量 血药浓度大概范围 　　　谢　　谢！ * * 药物代谢动力学实验 赵娣 中国药科大学药代研究中心 2012年10月16日 神农尝百草 传说神农一生下来就是个“水晶肚”，几乎是全透明的，五脏六腑全都能看得见，还能看得见吃进去的东西。那时候，人们经常因乱吃东西而生病，甚至丧命。神农为此决心尝遍百草，能吃的放在身体左边的袋子里，介绍给别人吃；不好吃的就放在身体右边袋子里，作药用。不能吃的就提醒人们注意。 * 生物样品 药物代谢动力学 定量研究药物（包括外来化学物质）在生物体内吸收、分布、排泄和代谢（简称体内过程）规律的一门学科。 常用测 定方法 HPLC-UV ? GC-MS ? LC-MS/MS ? 数据处理分析 1.HPLC原理与标准操作规程(SOP) 2.实验设计与动物实验 3.样品处理与方法开发 4.定性定量与分析测定 5.数据处理与药动学参数计算 6.实验报告 实验安排 静注加替沙星在家兔体内的药代动力学研究 HPLC原理与标准操作规程(SOP) 1.HPLC的组成 2.分配色谱的原理 3.色谱柱 4.流动相 5.定性与定量方法 6.样品的预处理 7.反相色谱分析方法的开发