重组il-17a对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠体内中性粒细胞凋亡的影响-effect of recombinant il - 17a on neutrophil apoptosis in acinetobacter baumannii sepsis rats.docxVIP

PAGE PAGE 1 重组 IL-17a 对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠体内中性粒细胞凋亡 的影响 中文摘要 目的：通过研究鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠体内中性粒细胞在不同时间点凋亡的情 况，并以两种不同剂量的重组 IL-17a 进行干预治疗，通过检测不同时间点中性粒 细胞凋亡率，caspase-3 的活性及凋亡相关蛋白 Bcl-2 及 Bax 蛋白的表达情况，，血 浆中可溶性 Fas 及炎症因子 IL-17 的浓度 ，并观察肝肺组织 HE 染色后的病理变 化，探讨重组 IL-17a 对鲍曼不动杆菌中性粒细胞凋亡的影响并其可能的机制。 方法：1、将 90 只清洁级健康成年雄性 wistar 大鼠随机分成 9 组：正常对照组（N）， 鲍曼不动杆菌脓毒症 12h、24h 组(S12h、S24h），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水 组（S12h+NS、S24h+NS），重组 IL-17 低剂量治疗 12h、24h 组(S12h+L、S24h+L）， 重组 IL-17 高剂量治疗 12h、24h 组(S12h+H、S24h+H）。正常对照组大鼠腹腔注 射等量生理盐水，而鲍曼不动杆菌脓毒症各组及干预治疗各组大鼠分别腹腔注射 鲍曼不动杆菌悬液；重组 IL-17 低剂量高剂量治疗各组大鼠尾静脉分别注射 rIL-17a0.001μg、1μg，余各组（鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组 12h,24h），大 鼠尾静脉注射等量生理盐水。2、正常组、不同时间点鲍曼不动杆菌脓毒症组及 rIL-17a 治疗组大鼠颈动脉采血后取肝肺组织，用密度梯度离心法提取中性粒细胞， 并 分离 血 浆 ， 通 过 形 态 学 观 察 和 DNA 片 段 化 的 检 测 分 析 其 凋 亡 情 况 ， 用 AnnexinV-FITC 和 PI 双染法检测中性粒细胞凋亡的变化，用分光光度法检测中性 粒细胞 Caspase 3 酶活性，ELISA 检测血浆中炎症因子 IL-17 及可溶性 Fas 含量的 变化，蛋白免疫印迹法检测中性粒细胞 Bax，Bcl-2 蛋白的表达，HE 染色法观察 肝和肺组织病理改变。 结果：1、与正常对照组相比，鲍曼不动杆菌脓毒症各组中性粒细胞凋亡率较正 常对照组明显降低（p＜0.05），与其他各组比较，尾静脉注射脓毒症大鼠高剂 rIL-17 相同时间点明显抑制 PMN 凋亡（p＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与 脓毒症组比较无明显差异（p＞0.05）；2、中性粒细胞 DNA 电泳结果显示高剂量 IL-17 12h,24h 出现梯状电泳图谱，其他各组 DNA 电泳条带均在加样孔附近；3、 与其他各组中性粒细胞的 Caspase3 的活性比较，较高剂量 IL-17 组 12h,24h 的 caspase-3 活性较其他各组均明显升高（p＜0.05），而较低剂量 IL-17 组 12h,24h 的 caspase-3 活性较其他组低（p＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与脓 毒症组比较 Caspase3 活性无明显变化（p＞0.05）；4、各组 S-Fas 的水平比较，低 剂量 IL-17 组，12h,24h 较其他组高（p＜0.05），高剂量 IL-17 组，12h,24h 较其他 组低（p＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与脓毒症组比较无明显差异（p ＞0.05）；5、病理切片 HE 染色可见鲍曼不动杆菌脓毒症各组肝脏组织炎症反应、 细胞损伤较明显，低剂量组炎症反应最重，肝细胞有片状坏死，而高剂量组则较 其减轻，正常对照组未见明显异常。6、与其它各组比较，中性粒细胞 Westernblot 结果：高剂量 IL-17 组 12h,24h 的 PMN 的 Bax 蛋白表达较其他组多（P＜0.05）， 低剂量 IL-17 组 12h,24h 的 BAX 表达较其他组少（p＜0.05），而对于 PMN 的 BCL-2 的蛋白的表达，高剂量组 12h,24h 较其他组低（p＜0.05），低剂量组较其他组高（P ＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与脓毒症组比较无明显差异（p＞ 0.05）。 结论 ：1、用重组 IL-17a 适时适度地干预在鲍曼不动杆菌脓毒症各组大鼠中性 粒细胞凋亡有可能成为治疗脓毒症的适宜措施；2、较高剂量的重组 IL-17a 可减轻 鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠的炎症反应，较低剂量的重组 IL-17a 可加重鲍曼不动杆 菌脓毒症大鼠的炎症反应；3、高剂量 rIL-17a 可能通过促进 Caspase 3 的活化，s-Fas 蛋白的表达，发挥促进 PMN 凋亡的作用，低剂量 rIL-17a 可能通过抑制 Caspase 3 的活化及 s-Fas 蛋白的表达，发挥抑制 PMN 凋亡的作用。 关键词：鲍曼不动杆菌，脓毒