第一讲 病毒.ppt

以大肠杆菌T4噬菌体为例： 头部：廿面体对称结构，由蛋白质衣壳构成，内含一条DNA。 颈部：薄盘状，附颈须。 尾鞘：长95nm, 衣壳粒螺旋对称；可伸缩。 尾髓:中空，DNA可由此进入细胞。 大肠杆菌T4噬菌体构造 蝌蚪形噬菌体的构造 基板: 六角形盘状物，其上有刺突、尾丝。 刺突: 有吸附功能。 尾丝: 有识别吸附功能。 噬菌体并没有个体的生长过程，而只有基本成分的合成和装配，所以一般将噬菌体的繁殖称做复制。 根据噬菌体与宿主的关系： 烈性噬菌体 温和噬菌体（或溶源性噬菌体） （二）噬菌体(phage)的繁殖 T-系噬菌体：是研究的最广泛而又深入的细菌噬菌体，按发现的先后顺序进行从T1～T7编号，后来发现其中偶数者的形态都相同（蝌蚪形收缩性长尾），故统称T偶数噬菌体。 烈性噬菌体：感染细胞后，能在寄主细胞内增殖，产生大量子代噬菌体并引起细菌裂解的噬菌体。 烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段： 即吸附、侵入、增殖（复制与生物合成）、成熟（装配）和裂解（释放） 1、烈性噬菌体的繁殖 ①吸附：噬菌体和宿主细胞上的特异性吸附部位进行特异性结合，噬菌体以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突“钉”在细胞表面上。 ②侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白质外壳留在细胞外。 ③复制：包括核酸的复制和蛋白质合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后，会控制宿主细胞的合成系统，然后以噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需的核酸和蛋白质。 ④装配： 主要步骤有： DNA分子的缩合——通过衣壳包裹DNA而形成头部——尾丝及尾部的其它部件独立装配完成——头部与尾部相结合——最后装上尾丝，至此，一个个成熟的形状、大小相同的噬菌体装配完成。 ⑤释放： 方式： 裂解：多以裂解细胞的方式释放。 分泌：噬菌体穿出细胞，细胞并不裂解。 通常情况下，一个噬菌体通过上述五个过程能合成100～300个噬菌体。烈性噬菌体的这种生长繁殖方式也称为一步生长。 烈性噬菌体繁殖过程示意图 噬菌体一步生长曲线 实验设计依据：1个菌体被1个噬菌体感染，避免二次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。 实验过程: 敏感菌10ml Phage 1ml 混匀，5min，使之吸附 离心或用抗phage血清处理，去除过量phage 高倍稀释，吸附phage的菌悬液(避免多次吸附) 37℃培养，定时取样 取样人为裂解处理（每5min）样品中加入氯仿裂解细胞 24~48h 裂解液加入敏感菌液中 适当稀释混合液 涂布于琼脂培养基上 计数噬菌斑 噬菌斑 噬菌斑: 概念：在涂布有敏感宿主细胞的固体培养基表面，若接种上相应噬菌体粒子由于先侵染和裂解一个细胞，然后以此为中 心，再反复侵染和裂解周围大量的细胞，结果在菌苔上形成一个具有一定形状、大小、边缘和透明度的噬菌斑。(每个噬菌斑一般是由一个噬菌体粒子形成的。) 应用： 噬菌斑可用于检出、分离、纯化噬菌体和进行噬菌体的计数 噬菌体一步生长曲线：以培养时间为横坐标，以噬菌斑数为纵坐标，绘制成的曲线为一步生长曲线。 潜伏期：从噬菌体吸附细菌到第一个噬菌体粒子装配之前的这段时期。噬菌体数无变化。样品中无游离的噬菌体。(5~10min) 裂解期：曲线直线上升，子代噬菌体不断释放到培养基中，直到达到一个极限。(20~30min) 稳定期：感染细胞后复制的子代噬菌体全部释放，噬菌斑数稳定，一次感染结束。 裂解量：每一受感染细胞所释放的噬菌体的平均数。 稳定期噬菌斑数 裂解量 = 潜伏期噬菌斑数 不同的噬菌体或同种噬菌体感染敏感菌后所释放的噬菌体数不同,与噬菌体种类、宿主细胞菌龄以及环境因素有关。 温和噬菌体：噬菌体感染细胞后，将其核酸整合（附着）到宿主的核DNA上，并且可以随宿主DNA的复制而进行同步复制，在一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。 原噬菌体（或前噬菌体）：即整合在宿主核DNA上的噬菌体的核酸。 溶源性细菌：指在细菌染色体上整合有原噬菌体的细菌。可进行正常生长繁殖，而不被裂解。 2、温和噬菌体与溶源性细