western免疫印迹常见问题解答-赛信通（上海）生物试.docVIP

Western免疫印迹方法 做Western免疫印迹时，将膜孵育在稀释的抗体中轻轻摇动并4°C过夜。抗体稀释在含5% 的w/v BSA或1X TBS, 0.1% Tween-20的脱脂奶粉当中。 注意：参考一抗的产品说明书选用合适的抗体稀释液和稀释比例。 A．所需溶液和试剂 注意：所有溶液用Milli-Q或相当级别的水配制。 1. 20X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS): (#9808) 配制1L 1X PBS时，取50ml 20X PBS用950ml RODI水稀释到1L，混匀。 2. 1X SDS 上样缓冲液： (#7722, #7723) 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8，25°C), 2% w/v SDS, 10% 甘油, 50 mM DTT, 0.01% w/v 溴酚蓝或酚红。 3. 转膜缓冲液： 25 mM Tris 碱, 0.2 M 甘氨酸, 20% 甲醇 (pH 8.5)。 4. 10X Tris缓冲盐水(TBS): 配制1L时，称取24.2g Tris碱，80g NaCl加入1L水中；调整pH为7.6（稀释至1X使用）。 5. 脱脂牛奶: (#9999) (重量体积比 [w/v]) 6. 封闭液： 含5% w/v脱脂奶粉，0.1% Tween-20的1X TBS。配150ml时，在135ml水中兑入15ml 10X TBS，混匀；加入7.