4电离辐射的生物效应.pptVIP

概述 电离辐射将能量传递给有机体引起的任何改变，统称为电离辐射生物学效应（ionizing radiation biological effect），人类的放射损伤是一种严重的病理性辐射生物效应 。 电离辐射对机体的作用首先是辐射能量向细胞分子的传递，包括水分子和生物大分子。进而影响细胞、组织、器官乃至整个机体。 生物大分子主要涉及DNA、RNA和蛋白质，其中DNA的辐射效应尤为重要。 一、小白鼠受γ-射线后LD50/15的测定 实验目的 1、观察不同剂量γ射线全身照射小白鼠后，在15天内死亡的百分率，测定小白鼠的LD50/15 。 2、掌握由外照射复制实验性急性放射病的一般方法及其照射动物的条件和程序。 实验原理 照射剂量与生物效应之间存在一定的相依关系。总的规律是剂量愈大，效应愈显著，但并不全呈直线关系。 电离辐射对多细胞机体特别是高等动物引起的死亡率变化的剂量效应关系呈一条S型曲线，曲线表明，当死亡率在50％附近时，曲线有急剧的变化，即在此处剂量较小的变化就引起较明显死亡率改变。因此将引起被照机体死亡50％时的剂量称为半致死剂量(LD50)，作为衡量机体放射敏感性的参数， LD50数值愈小，机体的放射敏感性愈高 一般以不同剂量的射线照射同种系、同性别、同年龄的小白鼠，使之产生急性放射损伤，以15天内小鼠的死亡率作为生物效应指标，得到剂量－死亡率曲线。 动物 健康雄性BALB/c小鼠，体重20±克。 照射方法与步骤 1、取120只雄性小白鼠，随机分成10组，每组分别放入二个动物笼内饲养。 2、计算：距放射源等距离时，不同的照射剂量，所需的时间（或照射时间相同时，动物距放射源的距离。 3、在每组动物笼壁上标明照射剂量，60Coγ射线的照射剂量分别为1.24、1.56、1.96、2.46、3.08、3.86、4.84、6.06、7.60、9.52Gy。各组在照射时间一半时，调节动物笼保证全身均匀照射。照后，常规饲养。 4、照射后按规定时间记录。每天上午、下午、晚上各观察一次，记录小白鼠的死亡数，共观察15天。 实验结果 1、小白鼠LD50/15计算统计表 2、利用目测概率单位法和寇氏法求出小白鼠LD50/15，并绘制出小白鼠死亡率曲线。 目测概率单位法 (1) 根据各组小白鼠死亡率，从百分率与概率单位对照表中查到各组死亡率的概率单位(死亡率0和100％者不列入计算)。 (2) 取方格坐标纸，横坐标表示剂量对数，纵坐标表示概率单位。 (3) 沿着各点的分布趋势，用直尺绘制出一条适合各点的直线，力求直线通过各点中间。 (4) 从概率单位5.0(死亡率50％)通过所画直线处找出相对应的对数剂量。 （5）再对对数剂量取反对数即得出实际LD50/15的照射量 实习报告 根据小白鼠LD50/15计算统计表的数据，用目测法和寇氏法计算出小白鼠LD50，并绘制小白鼠死亡率曲线，以及求出小白鼠LD50的可信限。 分析讨论思考题 1、使用放射源照射动物应注意哪些事项？ 2、怎样用随机方法对实验动物分组? 3、什么叫半数致死量（LD50），测定LD50有何意义? 二、电离辐射引起DNA链断裂的测定 实验原理 链断裂是电离辐射所致DNA损伤中常见的和重要的形式。电离辐射作用后引起DNA链断裂，产生片段化DNA。 许多荧光燃料可用来标记DNA，这些染料有：Hoechst、DAPI(4‘6-diamidino-2-phenylindole，4’6-二脒基－2-苯基吲哚)、溴化乙啶、吖啶橙等。 DAPI是DNA特异荧光染料，DAPI结合双链DNA的小沟，尤其是A-T碱基簇部分，为非嵌入方式，结合后，荧光增强约20倍。DAPI与DNA结合后以紫外激发，发射出明亮的蓝色荧光，用荧光分光光度仪测定出荧光强度。 关键技术 1、 裂解液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进DNA溶解。 2、已裂解的细胞液最好用硅化过的吸管吸取。硅化后玻璃不利于生物体如细胞、蛋白质、核酸的贴附。 3、 各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解。 4、 取各上清时,不应贪多,以防非核酸类成分干扰 5、提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。 6、所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。 试剂和主要仪器 一、试剂： 1、细胞裂解液1 10mmol／L Tris，pH 7.4 lmmol／L EDTA，pH7.5 0.5％ TritonX-100 2、细胞裂解液II(用时新鲜配制) 细胞裂解液中加入蛋白酶K 0.1mg