新型植物油莎豆DNA提取与SRAP体系优化.pdfVIP

2011年 1月 中国油料作物学报 2011，33(1)：039—043 Chinesejournalofoilcropsciences 新型植物油莎豆 DNA提取与 SRAP体系优化 赵永国，金梦阳，危文亮 (中国农业科学院油料作物研究所，农业部油料作物生物学重点开放实验室，湖北 武汉，430062) 摘要：以14个不同地理来源的油莎豆品系为实验材料，研究了油莎豆DNA快速提取方法；以SRAP反应体系 中DNA模板量 、Mg“浓度和引物浓度3个因子分别设置3个水平，共配制27个反应体系，对油莎豆SRAP反应体 系进行优化。研究结果表明：改良CTAB法可获得较高质量的DNA，参试材料的A ／A。介于 1．70—1．98；在27 个SRAP反应体系(15txL)中，最优反应体系为 DNA模板25ng、Mg“1．5mmol／L、引物浓度 1txmol／L、dNTPs0．3 mmol／L和Taq酶 1U，可扩增出清晰稳定的多态性条带。 关键词：油莎豆；DNA提取；SRAP；体系优化 中图分类号：$565．903 文献标识码 ：A 文章编号：1007—9084(2011)01—0039—05 DNA extractionandestablishmentofSRAPreactionsystem intigernut(Cyperusesculentus) ZHAO Yong—guo，JINMeng—yang，WE1Wen—liang (OilCropsResearchInstitute，CAAS，KeyLaboratoryofOilCropsBiologyofthe MinistryofAgriculture，Wuhan430062，China) Abstract：Inthisstudy，fourteen tigernutlinesfrom differentgeographicalareaswereusedtoinvestigatethe effectivemethodofDNA extraction and toconstructtheoptimized SRAP reaction system．Twentysevenreaction systemsweredesignedwiththreeconcentrationlevelsofDNA template，magnesium ionandprimers．Theresults showedthattheimprovedmethodofCTAB contributedtoabetterextractionofgenomicDNA oftigernut，andthe A26o／28ovaluesofallsamplesrangedfrom 1．70 to1．98．Outofthe27 reaction systems，the optimalsystem for SRAPanalysishad25ngDNA ，1．5mmoL／LMgC12，1Ixmol／Lprimers，0．3mmol／LdNTPsand1U Taqpolymerase in15 Ltotalvolume．Theseresultsprovidedtechnicalassistancetoevaluategerrnplasm resource，geneticdiversity andmolecularbreedingintigernut． Keywords：Cyperusesculentus；DNA extraction；SRAP；System optimization 我国油料供需矛盾 日益突出，大力提高我 国油 有利于促进油料种植业、加工业及饲料畜牧业等产 脂供给能力、保障食物消费安全，已成为研究者需要 业发展，带动农 民增收和就业 ，综合效益明显 j。 解决的一项重要的科研课题 “。油莎豆(tigernut， 国内外对油莎豆的研究较少，且大多集 中于油 CyperusesculentusL．)为莎草科一年生草本油料作