细菌转化跟平板筛选doc-西南大学·农学跟生物科技学院欢.docVIP

重组DNA的转化和蓝白筛选 体外连接的重组DNA分子导入合适的受体细胞才能进行大量复制，增殖和表达，其首要目的是获得大量的克隆基因。虽然PCR技术，体外转录及翻译系统能部分达到大量扩增的目的，但毕竟受到体外操作的许多限制。重组质粒导入宿主细胞最常用的方法之一就是转化（transformation）。转化这一概念来源于遗传学：细菌细胞的生物学由于吸收外源DNA发生可遗传的改变叫转化。很多细菌如杆菌，链霉菌属能自然发生转化，其它菌属包括大肠杆菌自然状态下无法发生转化，但可以通过人工诱导使其处在易于接受外源DNA分子的状态即感受态（competence），从而使转化得以高效率地进行。大肠杆菌的转化简便易行，它在分子 HYPERLINK /Search.asp?ModuleName=ArticleField=TitleKeyword=克隆 克隆中占据极为重要的地位。重组DNA转化细菌的技术操作关键就是通过化学方法，人工诱导细菌细胞进入一个敏感的感受态，以便外源DNA进入细菌内，这项技术始于Mandel 和Higa 1970年的观察，他们发现细菌经过冰冷的CaCl2 溶液处理短暂热休克后，容易被噬菌体感染，随后Cohn 于1972年进一步证明质粒DNA用同样的方法也能进入细菌。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase 的羟基-钙磷