第四节 微生物的培养和应用.docVIP

　　 微生物的培养与应用 主讲：黄冈中学优秀生物教师　王小敏 课题背景： 　　19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。由此人们认识到保持培养物纯净的重要性。 　　防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。在课题1中，我们将通过培养大肠杆菌（Excherichia coli）的实验，学习微生物培养的基本技术。 学习目标： 1、了解有关培养基的基础知识； 2、进行无菌技术的操作（重难点）； 3、进行微生物的培养。 一、基础知识 （一）培养基 　　培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1、培养基的类型和用途 　　（1）按物理状态来分： 类型 配制特点 主要应用 固体培养基 加入琼脂较多 菌种分离，鉴定，计数 半固体培养基 加入琼脂较少 观察运动、鉴定、菌种保存 液体培养基 不加入琼脂 工业生产，连续培养 　　　 　　液体培养基： ? 　　（2）按功能来分： 培养基类型 配制特点 主要应用 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别 选择培养基 添加（或缺少）某种化学成分 菌种的分离 　　例如： 　　鉴别培养基：用含有伊红—美蓝的培养基鉴别是否存在大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。 　　选择培养基：用含有青霉素的培养基可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到真菌（酵母菌和霉菌）。 　　（3）按成分来分 培养基类型 配制特点 主要应用 合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 菌种分类、鉴定 天然培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生产 2、培养基的营养成分 　　不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质。另外还需要满足微生物生长的pH、特殊营养物质，例如：生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 碳源、氮源、生长因子的比较 ? 来源 常用原料 功能 碳源 CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 糖类 构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养型生物的主要能源物质 氮源 N2、NH3、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏和蛋白胨等 铵盐、硝酸盐等 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 生长因子 维生素、氨基酸、碱基 ? 酶、核酸等的组成成分 1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 培养基组分 提供的主要营养 牛肉膏5g 碳源、磷酸盐和维生素 蛋白胨10g 氮源和维生素 NaCl 5g 无机盐 H2O定容在1000mL 氢元素、氧元素 3、培养基配制原则： 　　（1）目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。 　　（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 　　（3）pH要适宜：细菌pH为：6.5～7.5；放线菌pH为：7.5～8.5；真菌pH为：5.0～6.0。 （二）无菌技术 1、什么是无菌技术？ 　　无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法，包括： 　　（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒； 　　（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌； 　　（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； 　　（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 2. 消毒和灭菌有何不同？ 比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 强烈 全部微生物 能 　　灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 3、常用的消毒和灭菌方法有哪些？ 　　（1）消毒的方法： 　　①煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min； 　　②巴氏消毒法：70～75℃下煮30min或 80℃下煮15min； 　　③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源； 　　④紫外线消毒：接种室、接种箱、超净工作台用紫外线照射30min。 　　（2）灭菌的方法： 　　①灼烧灭菌 　　例如：接种环、接种针、试管口等。 　　②干热灭菌：160～170℃下加热1～2h。 　　例如：玻璃器皿、金属用具等。 　　③高压蒸气灭菌：是最常用的灭菌方法，100kPa、121℃下维持15～30min。 　　例如：培养基、无菌水等。 思考： 1、无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外