结核分枝杆菌Erp蛋白PGLTS4基序突变体构建.docVIP

结核分枝杆菌Erp蛋白PGLTS4基序突变体构建 　　摘要：以结核分枝杆菌H37Ra DNA为模板，通过PCR扩增，获得靶基因erp片段。采用重叠延伸PCR的方法得到erp基因PGLTS的4基序的突变体，依次删除突变体的C-末端、N-末端和C/N-端，构建重组质粒pET28a-C4、pET28a-N4、pET28a-CN4，转化BL21（DE3）pLysS。对重组菌株IPTG诱导后的表达产物进行Tricine SDS，得到大小分别约为11.2、15.4、4.8 ku的目的蛋白。Western blotting分析结果表明，目的蛋白表达特异。 　　关键词：结核分枝杆菌；重复输出蛋白；重叠延伸PCR；PGLTS；原核表达 　　中图分类号：S855.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0031-03 　　牛结核病是影响养牛业最为严重的疫病之一，且该病为人畜共患传染病，既造成了极大的经济损失还严重威胁着人类健康，其主要致病菌为牛结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）[1]。重复输出蛋白（exported repeated protein，ERP）是牛结核分枝杆菌上的一个重要毒力因子[2]，别称P36、Pirg或Rv3810，它是一种分泌蛋白，存在于结核分枝杆菌复合体所有成员（结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌