技本遗传学试验.doc

《遗传学》实验指导 2 参考《遗传学》，姚世鸿等主编，2001年3月，贵州人民出版社 实验一、果蝇的形态及培养技术 目的：（1）四种果蝇的形态识别。（2）了解果蝇生活史及其繁殖饲养方法。 原理：果蝇（Drosophila melanogester）属于昆虫纲双翅目果蝇属。具完全变态。 特点：(1) 生活史短，20-25℃下一般12天就可完成1代。(2) 繁殖能力强，每只受精的雌蝇可产卵400-500个。(3) 易于培养，常温下就可繁殖，培养饲料（如玉米粉、香蕉等）来源广泛，而且价格便宜。(4) 染色体少（4对）而且还有巨型唾腺染色体，便于遗传学观察和研究。(5) 突变体多，如不同形态的突变型多达400个以上。因此果蝇早已成为整个生物学研究的著名模式生物，其研究的深度和广度在生物界都是少有的。 材料：野生型果蝇，残翅型果蝇，黑檀体型果蝇，白卷小型果蝇。 原料和药品：略。 任务： (1) 配玉米粉培养基，大组长操作，其它观看。配方：水150ml：琼脂1.6克：蔗糖13克：玉米粉20克：丙酸1ml。 用800ml水，按比例配好后分装，约50管。每小组6管，大组共需36管。然后高压蒸汽灭菌1小时。 (2) 观察果蝇形态及识别各突变型。将形态特征按实验指导P486表格式作好记录并作为作业上交。 (3) 配制杂交组合：白卷小×野生型，残翅×黑檀体。分6小组，每小组2个组合共2个杂交管。管上贴标签，写明组合名称、小组名、时间。小组名采用数字表示法，如2-1为第2大组第1小组，以此类推。 问题： 如何培养和保存果蝇？用玉米粉等原料配制的培养基于中型试管中20-25℃下培养，待培养基用完后换入新培养基试管中继续于20-25℃下培养。保存果蝇可采用15℃下于恒温箱中培养。 如果果蝇突变体相互混杂，如何纯化？在羽化后12小时内选相同突变型的处女雌蝇与雄蝇一起单独培养。分别繁殖起来即可形成各种不同的纯合突变体群体。 突变体果蝇中混杂有野生型果蝇，如何纯化？在羽化后12小时内选突变体处女雌蝇与雄蝇一起单独培养。 如果野生型果蝇中混杂有突变体型果蝇，如何纯化？在羽化后12小时内选野生型处女雌蝇与雄蝇1对1单独培养，从若干对果蝇的后代谱系中选择无分离者。 如何防止在果蝇繁殖中的发霉现象？消毒彻底，多加一点酵母粉，瓶塞打开时间短一点，注意卫生。 识别果蝇雌雄的特征是什么？ 体型特征：雌大雄小。 腹部特征：雌腹部背5黑环蚊，雄背3黑环蚊；雌腹部服面6腹片，雄4腹片；腹尾较尖、外生殖器雌简单、无色，雄腹尾较钝、外生殖器复杂、褐色。 第1对足特征：雌无性梳，雄有性梳。 为什么果蝇能成为模式动物？ 因为：(1) 生活史短，20-25℃下一般12天就可完成1代。(2) 繁殖能力强，每只受精的雌蝇可产卵400-500个。(3) 易于培养，常温下就可繁殖，培养饲料（如玉米粉、香蕉等）来源广泛，而且价格便宜。(4) 染色体少（4对）而且还有巨型唾腺染色体，便于遗传学观察和研究。(5) 突变体多，如不同形态的突变型多达400个以上。因此果蝇早已成为整个生物学研究的著名模式生物，其研究的深度和广度在生物界都是少有的。 残翅型、黑檀体型、白卷小型与野生型相比，主要区别特征是什么？ 残翅型：翅退化不完整。黑檀体型躯体为浅黑色。白卷小型为白眼、卷刚毛、小翅。 实验二、果蝇唾腺染色体的观察技术 目的：（1）掌握唾腺的分离技术；（2）掌握唾腺染色体制片技术；（3）了解唾腺染色体的形态特征。 原理：Drosophila melanogester果蝇染色体数为8。分别为X、II、III、IV染色体。在唾腺中，由于核内有丝分裂及同源染色体的假联会，形成多线染色体。在显微镜下可识别5个染色体臂，即X、2L、2R、3L、3R。第IV染色体太小，不易观察到。 材料：经低温0-8℃下处理1天的果蝇三龄幼虫。 原料和药品：略。 步骤： 唾腺的分离。于生理盐水中，在用解剖针按住幼虫尾部1/3处，用另一解剖针从头部拉出唾腺。然后，于显微镜下观察唾腺形态，并用解剖针去除唾腺上的脂肪细胞。用吸水纸吸去生理盐水。 唾腺细胞的解离：加小滴0.1mol/L的HCl解离2-3分钟。用吸水纸吸去HCl后，加蒸馏水洗2-3次。用吸水纸吸去蒸馏水。 染色：加1滴醋酸洋红染色5分钟， 制片：盖上干净的盖片、轻度垂直下压。 观察：显微镜观察。 永久制片：玻片经下列步骤脱水和透明，然后于材料上加一小滴二甲苯溶解的加拿大树胶，然后将盖片材料面向下盖上，使树胶充满整个盖片与载片之间的空间。 1 2 3 4 5 冰醋酸:无水酒精(1:1=80ml) 无水酒精(=80ml) 无水酒精:二甲苯 (2:1=90ml) 无水酒精:二甲苯(1:2=90ml) 二甲苯(=80ml) 玻片倒放于玻璃棒上 直至盖片脱离 材料面向上 5 分钟 材料面