转导芦苇总DNA耐盐变异水稻SSH文库构建及部分基因特异表达.docVIP

转导芦苇总DNA耐盐变异水稻SSH文库构建及部分基因特异表达 　　摘要：通过花粉管通道转导芦苇总DNA到水稻辽星1号中，以获得的2个耐盐变异水稻品系H1、H2为材料，对6张叶的水稻幼苗进行0.3%浓度的NaCl溶液诱导处理24 h。提取经NaCl溶液诱导后的叶片mRNA，经反转录成 cDNA，经过酶解后加接头和2次杂交，构建差异表达的抑制消减（SSH）cDNA文库。以NaCl溶液诱导后的耐盐变异水稻H1、H2的cDNA为检测子（tester），以水稻辽星1号cDNA为驱动子（driver）。所构建的文库容量分别达到了240、281个，表明所构建的文库质量良好。对文库中克隆进行测序分析，在NCBI水稻数据库中进行BLAST比对，获得了15个没有同源性的EST序列，其中9个EST序列功能与植物的抗盐性有关，通过RT-PCR技术进一步验证了芦苇总DNA转导到水稻中，使水稻获得了抗盐性。 　　关键词：水稻；芦苇；抑制消减杂交；cDNA文库；基因表达 　　中图分类号： S511.01 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）03-0013-04 　　我国沿海盐渍稻区常利用盐水灌溉，过量施用肥料导致土壤盐分积累以及水稻产量下降[1]。因此，选育耐盐的水稻新品种、充分开发利用盐碱地对于实现农业增收、保障粮食安全具有重要的意义[2-3]。通过生物技术手段可以加速耐