银杏雄株叶片聚戊烯乙酸酯水解最佳工艺研究.docVIP

银杏雄株叶片聚戊烯乙酸酯水解最佳工艺研究 　　摘要：银杏聚戊烯醇是银杏叶中重要的药用、保健作用的有效成分，其主要以乙酸酯的形式存在，少量以游离醇的形式存在，在提取银杏聚戊烯醇的过程中将聚戊烯乙酸酯水解为聚戊烯醇，可提高银杏叶中聚戊烯醇的含量。在单因素试验的基础上，利用响应面法优化银杏雄株叶片聚戊烯乙酸酯水解的工艺，以影响聚戊烯乙酸酯水解的料液比、时间、温度为主要作用因子，采用高效液相色谱法（HPLC）测定聚戊烯醇含量，经Design-Expert软件分析数据，得到银杏雄株叶片聚戊烯乙酸酯水解的最佳条件为料液比1 g ∶3 mL、水解时间90 min、水解温度37 ℃，在此最佳工艺组合条件下，银杏雄株叶片中聚戊烯醇得率的实际测定值达1536%。 　　关键词：银杏雄株；聚戊烯乙酸酯；聚戊烯醇；响应面法；HPLC 　　中图分类号： R2842文献标志码： 　　文章编号：1002-1302（2017）16-0170-04 　　[HJ14mm] 　　收稿日期：2016-04-06 　　基金项目：江苏省连云港市科技局农业科技攻关项目（编号：CN1301）。 　　作者简介：葛金涛（1987―），男，山东潍坊人，硕士，助理研究员，主要从事果树与观赏树木遗传育种研究。E-mail：672643419@qqcom。 　　通信作者：吴秋月，硕士，农艺师，主要从事果树与观赏树木遗传育种研究。E-mail：709728218@qqcom。[HJ] 　　银杏聚戊烯醇是由15～21个异戊烯单元构成的线性类脂化合物，具有重要的药用和保健价值。研究表明，银杏聚戊烯醇是人体多萜醇的结构类似物，是合成人体多萜醇及其衍生物的最佳中间体，代谢后可形成多萜醇以补充人体内多萜醇的不足，而多萜醇是人体生理活动不可缺少的元素之一，因此，银杏聚戊烯醇具有重要的生理和药用价值，可以提高人体的免疫功能、抑制癌细胞转移[3]、促进肝细胞再生[4]以及增强膜的融合[5]等。 　　银杏聚戊烯醇主要以乙酸酯（polyprenyl acetates，PPAs）的形式存在于银杏叶片中，少量以游离醇（polyprenyl alcohols，PPs）的形式存在。因此，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）分析聚戊烯醇时，需对样品进行水解处理，将PPAs转变为PPs。水解采用的皂化剂一般有2种，一种是水-碱溶液，如NaOH-H2O、KOH-H2O等；另一种是醇-碱溶液，如NaOH-乙醇/甲醇等。Tateyama等采用浓度较高的KOH溶液在70 ℃以上进行水解[6-7]。Huh等采用弱碱K2CO3溶液水解，反应时间长达12 h[8]。杨克迪等采用5% NaOH甲醇溶液在常温下水解样品，聚戊烯乙酸酯完全水解的时间仅需25 h[9]。综合前人的研究经验，本试验采用5% NaOH甲醇溶液作为皂化剂，利用单因素试验和响应面法（response surface methodology，RSM）探讨料液比、水解时间及水解温度3个影响因子及各影响因子之间的交互作用对银杏雄株叶片中聚戊烯乙酸酯水解的影响规律，进而得到最佳的工艺组合。 　　1材料与方法 　　11试验材料 　　银杏（Ginkgo biloba L）叶片，于2011年9月取自扬州大学银杏园内栽培管理一致的20株十三年生雄株，每株采集100片。采摘后洗净，沥干，105 ℃杀青，80 ℃烘干，粉碎过80目筛得银杏叶粉末，置于-18 ℃密封保存。聚戊烯醇标准品（C90-Prenol），购自瑞典Larodan公司；水解用的石油醚、正己烷、乙酸乙酯，均为分析纯，HPLC用的甲醇、??丙醇、正己烷为色谱纯，200～300目硅胶，HPLC用水为超纯水，其他用水为双蒸水。 　　高效液相色谱仪（Shimadzu LC-10A），购自日本岛津公司；紫外检测器（SPD-10A），购自日本岛津公司；电热恒温鼓风干燥箱，购自上海森信实验仪器有限公司；超声波清洗器，购自江苏省昆山市超声仪器有限公司；旋转蒸发仪，购自上海亚荣生化仪器厂；高速冷冻离心机，购自湖南长沙平凡仪器仪表有限公司。 　　12银杏叶聚戊烯醇提取液的制备 　　称取3 g银杏叶粉末进行超声波提取（正己烷为提取溶剂，料液比1 g ∶12 mL，超声时间60 min，温度38 ℃），过滤得正己烷提取液，超声波水解（皂化剂为5%氢氧化钠甲醇溶液），取上层黄色澄清液体，旋转蒸发，硅胶柱层析（洗脱液为石油醚和乙酸乙酯，体积比为9 ∶1，收集20 mL），蒸发至膏状，溶于2 mL正己烷中，制备成聚戊烯醇提取液，即正已烷浸提液。 　　13聚戊烯醇标准曲线的绘制 　　131色谱条件 　　色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（150 mm×46 mm，5 μm），流动相：异丙醇、甲醇、正己烷、水，体积比