实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立-食品与发酵工业.PDFVIP

第 卷 第 期 陈 颖等：实时荧光定量 技术检测转基因大豆方法的建立 ’ O ()* 实时荧光定量!# 技术检测转基因大豆方法的建立! ! ! ! ! # 陈 颖 徐宝梁 苏 宁 王 媛 王丙武 葛毅强 （中国进出口商品检验技术研究所，北京， ） （中国农业大学食品学院，北京， ） ! !$$$% !$$$’ （科技部中国农村技术开发中心，北京， ） # !$$$% 摘 要 采用实时荧光定量 ()* 技术，通过使用特异的引物和探针，对大豆中的内源基因 +,-./0 和转基因大豆中的外源基因1(2(2 进行了定量检测，建立了340560.4 公司生产的商 * 业化转基因大豆*47087 :*,68 的定量()* 检测方法。该方法的检测灵敏度 $ = $ ! ，是 9 ; 国际上设定的转基因最低限量的!$$ 倍。 关键词 荧光定量()*，转基因大豆，转基因检测 随着近年来人们对转基因作物安全性的 比，该技术实现了()* 从定性到定量的飞 日益重视，对转基因产品检测方法的研究发 跃，而且，它具有特异性更强、有效解决()* 展十分迅速，转基因产品的定性检测技术已 污染问题、自动化程度高等特点。 由筛选检测深入为对目的基因的特异性检 实时荧光定量()* 比常规()* 多一个 测。与此同时，随着各国有关 A 3 B（,0,./: 寡聚核苷酸探针，该探针与摸板特异性结合， C -6DD; E48/F/,8 4GC60/5E ）标签法的建立和不 并带有一个荧光发光分子和一个荧光淬灭分 断完善，转基因成分的准确定量检测也显得 子，完整的探针在激光激发下，发光分子所产 日趋重要，很多国家不但要求对转基因产品 生的荧光被淬灭分子全部吸收，样品无荧光， 进行定性检测，还需要对产品中的 含 而 扩增过程中， 酶分子在链延长的 A 3 B ()* N 6J 量进行定量检测，以便标识。挪威是世界上 过程中可以通过自身的 ’ ’核酸外切酶降 % :# 第一个要求对转基因产品进行含量标识的国 解与模板结合的特异性荧光探针，使得荧光 ［］ 家，该国对转基因的限量为 ! ；欧盟和瑞 发光分子从探针上切下来而与荧光淬灭分子 士规定食品中 成分超过 则必须进 分开，从而在激光激发下产生特定波长的荧 A 3 B ! ［， ］ 行标识；日本的限量标识为% # 。 光，模板每复制一次，就有一个探针被切断， 目前，定量()* 检测方法是对转基因产 伴随一个荧光信号的释放。所以荧光信号的 品进行定量标识的主要方法。但传统 ()* 强弱就代表了模板的数量。由于被释放的荧 定量方法如内参照法、竞争法和()*:1+H