绿色荧光蛋白GFP的显微观察及其在转基因研究中的应用.PPTVIP

普通生物学实验GFP报告基因的显微观察及其在生物学研究中的应用 报告基因－reporter gene 编码可被检测的蛋白质或酶的基因,其表达产物容易被鉴定； 将它的编码序列和目的基因的表达调控序列或目的基因相融合，转化到生物体中； 通过检测其表达可以研究在生物体内，调控序列的作用方式或目的基因的表达调控。 报告基因的特点 已被克隆和全序列已测定； 表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物； 其表达产物容易观察或能进行定量测定 常用的报告基因 基因名称 基因编码蛋白 检测方法 GUS β-D-glucuronidase（β-D-葡萄糖苷酶） 催化底物形成β-D-葡萄糖苷酸，它在植物体中几乎无背景，组织化学检测很稳定 Luciferase 荧光素酶 在有ATP、Mg2＋、O2和荧光素 （luciferin）存在下发出荧光 (化学发光，chemiluminescent） GFP 绿色荧光蛋白 蓝色激发光下发出绿色荧光 1: GUS 报告基因 广泛用于植物、细菌和动物的基因表达研究 β-D-glucuronidase（β-D-葡萄糖苷酶）催化底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸(X-Gluc) 形成蓝色产物。 检测方法： 组织化学法（最常用）、 分光光度法（最灵敏）、 荧光法 植物茎尖生长点WUS、CLV3、RAX1、LAS、MY