发酵——糖、氮、磷检测方法.docVIP

(六)总糖含量测定 总糖:指在酸性条件下完全水解生成葡萄糖的糖的总和。 1.操作程序 1.1.原理:多糖经酸水解后,生成的葡萄糖分子的醛基具有还原性,可在碱性条件下将二价铜离子还原成一价铜离子。二价铜离子在酸性条件下与碘化钾作用析出游离碘,用硫代硫酸钠标准溶液进行滴定,据此可计算出溶液中二价铜离子的含量。通过检测加入样品后溶液中二价铜离子消耗量,可间接计算或查表得出样品中总糖的含量。 1.2.反应式 酸性 （1） 酸水解 (C6H10O5)n+nH2O = n(C6H12O6) （2）碱性二价铜离子制备 CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4 CHOHCOOK O─CHCOOK +Cu(OH)2 =Cu +2H2O （3） CHOHCOONa O─CHCOONa CHO O─CHCOOK COONa  CHOHCOOK （4）葡萄糖还原反应 (CHOH)2 +2Cu +NaOH+H20 =(CHOH)4+Cu2O↓+2 CHOHCOONa CH2OH O─CHCOONa CH2OH （5）碘化钾还原溶液中剩余二价铜离子: 酸性 2Cu2++4KI = Cu2I2+4K++I2↓ （6）硫代硫酸钠滴定反应: 酸性 2Na2S2O3+I2 =Na2S4O6+2NaI 1.3.试剂:斐林混合液:6.0mol/l盐酸,4.0mol/l盐酸,0.5%淀粉指示剂, 0.1mol/l硫代硫酸钠滴定溶液。 1.4.器具及仪器:0.05ml、1ml、5ml吸量管,25ml容量瓶,25ml酸式滴定管,25ml碱式滴定管,大试管H.H.S91-6电子恒温水浴锅,漏斗,试管。 1.5.操作 1.5.1.糖标准曲线制作:准确称取0.6000g(±0.0005g)分析纯葡萄糖于100ml容量瓶中,加水溶解、定容、摇匀。精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml、4.5ml、5.0ml上述溶液于大试管中,准确加入10ml斐林混合液,100℃ 沸水浴10分钟后,取出冷却至室温。用酸式滴定管加入6.0ml 6.0mol/L盐酸,边加边轻轻振荡,使盐酸与试管内溶液充分接触。用硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液将显乳白色时，加入1-2ml0.5%淀粉指示剂，继续滴定至蓝色刚好消失。以葡萄糖加入量为横坐标,滴定数为纵坐标,在坐标纸上绘出曲线图,然后从中查出每间隔0.1ml滴定数所对应的葡萄糖量,并绘制成表格。 1.5.2.样品测定: 将发酵液过滤,精密量取续滤液1.00ml于25ml容量瓶中,加入4.0mol/l盐酸5.0ml,沸水浴加热10分钟,取出冷却至室温,用纯化水定容,摇匀。精密量取上述水解液2.5ml于大试管中,加入10.00ml斐林试剂,同时以10.00ml斐林试剂作空白, 沸水浴加热10分钟,冷却至室温,加入6.0mol/l盐酸6.0ml,用硫代硫酸钠标准溶液滴定, 溶液将显乳白色时，加入1-2ml0.5%淀粉指示剂，继续滴定至蓝色刚好消失。 1.6.