默克生命科学低丰度蛋白WB检测方案pdf.PDFVIP

低丰度蛋白检测 Western Blot成功率大幅度提升的秘籍 • 样品制备：低丰度蛋白富集，coIP/IP，浓缩 • ® 转印与封闭：即用型PVDF Immobilon -E转印膜 高载量转印膜，小分子封闭剂 • 检测：优质抗体，免疫信号增强剂 • 显色：超敏HRP底物 • 再杂交：温和抗体剥离 默克生命科学 Millipore为你提供的特色Western Blot工具 步步稳健，好的数据尽在掌握 制备优质的蛋白样品是Western Blot成功的起点，特别是对于低丰度目的蛋白。裂解细胞/组织时防止蛋白降解， 从复杂的样品进行分离和精制（比如分部富集/去除高丰度蛋白，coIP/IP）等策略，都是保障有足够目的蛋白进 入下一步的关键。最后，对样品进行有效的浓缩和缓冲液置换，也为样品制备环节加分。 裂解 分部 浓缩/ coIP/IP 抽提 富集 换液 • RIPA试剂温和有效地进行 • 蛋白富集试剂盒：包 括 • 预包被B S A 的P r o t e i n • Amicon® Ultra 超滤管： 细胞/组织裂解 （跨）膜蛋白、核蛋白、4 A / G 琼脂糖珠，配 合 有0.5/2/4/15mL体积、 种亚细胞组分、线粒体、 Amicon® Pro纯化浓缩管 3/10/30/50/100kDa截留 • 蛋白酶抑制剂混合物：防 高尔基体、溶酶体、内质 进行离心操作，琼脂糖珠也 分子量等规格可供选择。是 止蛋白降解，提高实验的 网、过氧化物酶体等。使 能获得信噪比好的结果 对蛋白进行脱盐、缓冲液置 成功率和数据可比性 目标蛋白所在组分获得富 换和浓缩操作的最佳工具 集，也便于蛋白定位及分 • IP 磁珠 （有Protein A/G、 布变化的探讨 FLAG®、HA、c-Myc、GST、 His、生物素等），配合可拆卸 • 高丰度蛋白去除试剂盒： 8 孔磁力架使用 ⸺ 磁珠法 去除血清/ 血浆/ 脑脊液等 已经逐渐成为 IP 的主流方法 中的白蛋白、IgG等，提高 低丰度的蛋白表现度 • 完整的 IP 试剂盒品种包括 FLAG® ，c-myc，HA，GST 等 0.5