异氟烷对人精子运动功能与顶体反应影响研究.docVIP

异氟烷对人精子运动功能与顶体反应影响研究 　　【摘要】目的：观察异氟烷对人精子运动功能、体外获能以及精子顶体反应的影响，对有生育要求的男性提供临床用药依据。方法：收集我院男科门诊就诊的男性精子标本，从中筛选出18份活力正常精子的精液作为标本，每例精液均分成3份，分别放置于3个试管中，分别给予11%异氟烷（ISO1组）、22%异氟烷（ISO2组）和空气作为对照组，把所有的有机玻璃箱放置于孵箱培养5h，对精子的运动、获能、顶体反应进行评价。结果：11%和22%浓度的异氟烷作用于精子5h以后，与对照组相比，精子的运动活力、直线速度、曲线速度、平均速度均明显下降，P005。两组精子发生顶体反应的百分率均较处理前明显增加，P005，差异有统计学意义。但是处理后两组间比较无明显差异。结论：异氟烷能够抑制精子的运动和获能，并且随着浓度的增加，抑制作用增强；异氟烷对精子顶体反应影响不明显。 　　【关键词】麻醉；异氟烷；精子运动；精子获能；顶体反应 　　【中图分类号】R917+.2【文献标志码】A 　　近些年来，随着各种科技的发展，麻醉学也迅猛发展起来，全身麻醉药在临床治疗中的应用范围也越来越广，由于麻醉药物副作用较多，社会和学术界目前对其安全性普遍关注。对于全身麻醉药物的研究，多集中在神经毒理学方面，已经较为深入，但是其生殖毒性的研究尚有不足，其机制也尚不能完全阐释清楚。目前临床上吸入麻醉药的应用相当广泛，异氟烷是临床非常常见的一种吸入性全身麻醉药，相关报道认为，异氟烷在细胞水平上不但可以影响细胞的分化，还会破坏染色体DNA结构[1]。本研究观察异氟烷对人精子运动功能、体外获能以及精子顶体反应的影响，对有生育要求男性提供临床用药依据。1材料与方法 　　11仪器与试剂 　　计算机辅助的精液分析仪（CASA）应用由北京中科恒业科技有限公司生产的彩色精子自动分析仪（型号：ZKPACS-E型），精子培养液HTF液应用美国Irvine公司生产的产品，异氟烷（商品名活宁，国药准字上海雅培制药有限公司生产，规格100mL）。 　　12精子悬液制备 　　精子标本来源于我院男科门诊就诊的男性，从中筛选出18份活力正常精子的精液作为标本，本研究中，精子标本精子活力均80%，活率在90%以上，精子密度50×106/mL，异常精子形态不足15%，其余指标均符合WHO诊断标准。18份实验标本提供者年龄在25～39岁，平均年龄（3119±405）岁，排除心、肾等系统严重疾病，禁欲3～ 5 d，取样本前48h未服用可能会对精子产生影响的药物或食物，如酒、咖啡等。取精的方式为手淫取精，在精液液化后，采用上游法进行优化，然后用HTF培养液把精子密度调节到（40～80）×106/mL。 　　13实验方法及分组 　　将18例正常活力的精液标本，每例精液均分成3份，分别放置于3个试管中，分别给予11%异氟烷（ISO1组）、22%异氟烷（ISO2组）和空气作为对照组。将培养皿分别放在不同的有机玻璃箱内，密闭玻璃箱，把含5%CO2、95%空气的混合气体作为载气，调节挥发罐的刻度，异氟烷暴露浓度分别为11%、22%，把所有的有机玻璃箱放置于37℃的孵箱中，保持恒定温度，培养5h[2]。 　　14精子运动功能的评价 　　对所有精子的活动状态进行密切观察，计算分析精子的各项运动参数，包括曲线速度（VCL）、精子运动活力（a+b）%、平均速度（VAP）、头部侧向运动平均振幅（ALH）、直线速度（VSL）。根据WHO（1999）的标准可以把精子的活力分成a、b、c、d 4个级别：a级代表精子的活动非常好，能够快速向前呈直线运动；b级代表精子活动尚可，能够向前直线运动；c级代表精子活动力比较一般，不能向前直线运动，只能曲线运动；d级代表精子活动能力比较差，不能做任何向前运动，只可以在原地蠕动。临床上一般以（a+b）%作为精子活动力大小的指标。 　　15精子获能以及顶体反应的评价 　　评价方法是根据精子和金霉素（CTC）荧光结合类型而定，共有三种结果，分为三型[3]：精子未能获能，顶体仍然完整，为F型；精子虽然获能，但是顶体后区无荧光或者仅仅有微弱的荧光，为B型；精子获能，发生顶体反应，顶体已经不完整，为AR型。精子的获能程度以B型和AR型合计数所占的比例来计算。 　　16统计学处理 　　采用SPSS160软件对所有数据进行分析，计量资料比较用t检验，计数资料比较用卡方检验，P005认为差异有统计学意义。 　　2结果 　　21异氟烷对精子运动功能的影响 　　11%和22%浓度的异氟烷作用于精子5h以后，与对照组相比，精子的运动活力、直线速度、曲线速度、平均速度均明显下降，P005。见表1。 　　22异氟烷对精子体外获能的影响 　　与对照