pBoLn-TEasy载体快速连接试剂盒.PDFVIP

◆ pBoLn-T Easy 载体快速连接试剂盒 ◆ 目录号1711 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 pBoLn-T Easy 载体快速连接试剂盒 pBoLn-T Easy Quick Ligation Kit 目录号：1711  试剂盒组成、储存、稳定性： 20 次 60 次 20 次 60 次 试剂盒组成 (171101) (171102) (171103) (171104) pBoLn-T Easy Vector 20l 60l 20l 60l (30ng/l) 1000bp Control （30ng/l） 5l 5l 5l 5l 10 PEG Enhancer 50l 150l 50l 150l 10 x Ligation Buffer 40l 120l 2 Quick Ligation Buffer 100l 300l T4 DNA ligase, 5U/l 20l 60l －20℃储存，6 个月内不影响使用效果。  产品介绍： pBoLn-T Easy Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。这种载 体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成，和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同， pBoLn-T Easy 通过改造pBlueScript II SK(+) ，在原pBlueScript II SK(+) 多克隆位点引入 Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基，因此有更高的 重组效率。同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点，需要在PCR扩 增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA 酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大 提高酶切效率，增加亚克隆成功率。此外，本公司载体连接体系还有背景低（蓝斑小 于10%），重组率高（白斑中超过90%有插入片段），可快速连接等特点。本说明书末 列出了pBoLn-T Easy 载体相关的技术资料，其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列， - 1 - 只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。 测序推荐采用M13 通用测序引物（见后面图谱）  操作步骤： 1. 连接反应的准备： PCR产物是否要进行纯化取决于扩增产物的质量。如果PCR产物非常干净，不经 纯化就可直接进行连接反应。但如果是以质粒为模板的PCR产物则必须进行纯化， 模板质粒有可能也形成白斑。PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳分离。本公司生 产的DNA产物快速纯化回收试剂盒对70bp 以上的DNA片段能很好地进行回收。 Taq、Tth、AmpliTaq 、KlenTaq DNA聚合酶扩增的PCR产物，其末端都带有一个 突出的3’ A 。 具有3’ A末端的PCR产物可以直接用pBoLn-T Easy 载体进行克 隆连接。具有3’5’外切酶活性的DNA聚合酶（高保真酶）扩增的PCR产物是平 末端，要对这种平末端PCR产物进行克隆，应先进行3’端加A工作。 2. 常规连接反应： 1) 在一个标准的10 l 连接反应体系中，加入1 l 30ng pBoLn-T Easy 载体、X l PCR 产物(在通常状况下，没有必要对PCR 产物进行精确定量，一般PCR 产物与载体 的摩尔比优化至2:1~10:1 就可以得到良好结果，推荐3:1)、1l 10ligation Bu