聚乙烯亚胺戊二醛交联法固定化重组酯酶大肠杆菌细胞.PDF

第 １５卷第３期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１５ Ｎｏ３ ２０１７年５月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍａｙ ２０１７ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１７０３００２ 聚乙烯亚胺／ 戊二醛交联法固定化重组 酯酶大肠杆菌细胞 郑建永，李天一，张　 伟，汪　 钊 （浙江工业大学 生物工程学院 浙江省生物有机合成技术研究重点实验室，浙江 杭州 ３１００１４） 摘　 要：利用聚乙烯亚胺／ 戊二醛交联法对重组酯酶大肠杆菌Ｅ． ｃｏｌｉ ＢＬ２１细胞进行固定化研究，并对交联工艺条 件进行优化。 结果表明：在大肠杆菌细胞质量浓度２００ ｇ／ Ｌ、硅藻土质量浓度２ ｇ／ Ｌ、聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）体积分数 ３％、交联时间１５ ｈ、戊二醛（ＧＡ）体积分数０５％以及交联时间０５ ｈ 时，固定化细胞的酯酶活力最高。 固定化细 胞的最适反应温度和ｐＨ分别为４５ ℃和 ８０，且温度稳定性和 ｐＨ稳定性均高于游离细胞。 当底物浓度为３００ ｍｍｏｌ／ Ｌ时，固定化细胞重复使用１５批次后，其相对酶活仍能保留在８０％以上。 因此，该固定化细胞具有良好的操 作稳定性。 关键词：聚乙烯亚胺；戊二醛；固定化；交联；酯酶 － － － 中图分类号：Ｑ８１９　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１７）０３ ０００７ ０５ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｓｔｅｒａｓｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｃｒｏｓｓ⁃ｌｉｎｋｉｎｇ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ⁃ｇｌｕｔａｒａｄｅｈｙｄｅ ＺＨＥＮＧＪｉａｎｙｏｎｇ，Ｌｉ Ｔｉａｎｙｉ，ＺＨＡＮＧ Ｗｅｉ，ＷＡＮＧＺｈａｏ （Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００１４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ｅ． ｃｏｌｉ ＢＬ２１，ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓ⁃ｌｉｎｋｅｄ ｓｙｓｔｅｍ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ ａｎｄ ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ ａｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ２００ ｇ／ Ｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ２ ｇ／ Ｌ ｄｉａｔｏｍｉｔｅ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ ｃｒｏｓｓ⁃ｌｉｎｋｅｄ ｉｎ ３％ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ （ＰＥＩ） ａｎｄ ０５％ ｏｆ ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ （ＧＡ） ｆｏｒ １５ ｈ ａｎｄ ０５ ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｏｆ ｔｈｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅ４５ ℃ ａｎｄ８０． Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｄａｔａ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄｐＨｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆｔｈｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｆｒｅｅｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅ ｒｅ