第5章离子交换与色谱课件.ppt

2. 漩涡式连续离子交换设备 离子交换树脂及处理液在交换器中在螺旋输送器的推动下，逆流接触，呈漩涡状流动。 优点：能连续生产、供液不间断，而且效率高；树脂利用率及再生饱和程度高，因而再生液耗量较省；操作管理较为方便。 缺点：树脂磨损较大。 第二节 色谱分离原理与设备 色谱技术是利用混合物中各种组分的物理化学性质（分子的形状和大小、分子的极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）不同，使各组分以不同程度分布在两相（流动相、固定相）中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而达到分离的目的。 色谱分离也称为层析分离或色层。 色谱（层析）分离分类 按流动相的状态不同可分: 液相色谱（liquid chromatography）； 气相色谱（gas chromatography）； 固定相的使用形式不同可分： 柱层析； 纸层析； 薄层层析； 按分离机制不同可分为： 离子交换色谱； 吸附色谱； 分配色谱； 疏水作用色谱； 凝胶层析（色谱）； 亲和层析（色谱）等。 色谱分离设备的组成 组成： 输液泵、进样器（阀）、色谱柱、检测器、收集器等组成。 色谱设备的组成 各部件主要作用 泵：推动溶液，它是层析系统的心脏。阀系统：控制溶液的流向，提供自动控制层析过程的可能性。层析柱：填装不同的层析介质，使混合物在通过它时，因不同蛋白分子与层析介质作用强度不同，因而迁移速度不同，从而分开混合物。检测器：确定混合物中各物质的位置和浓度，以及缓冲液的各种参数。收集器：用来收集样品。 液相色谱的基本流程图 流动相 泵 色谱柱 检测器 输液系统 分离系统 检测系统 记录系统 A E G B C D F 进样阀 进样系统 色谱系统的进样与洗脱 洗脱 进样 进样器 阀 流动相 泵 阀 柱 检测器 组分收集与记录仪 一、凝胶色谱 利用凝胶粒子（凝胶过滤介质）为固定相，根据料液中溶质相对分子质量的差别进行分离的液相层析法。凝胶（色谱）层析又叫分子筛层析，是20世纪60年代发展起来的一种分离纯化方法。凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排阻在外部，当一混合物溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子质量筛分开。 (一) 基本原理 凝胶过滤层析所用的基质是具有立体网状结构、筛孔直径一致，且呈珠状颗粒的物质。这种物质可以完全或者部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外，而不能排阻某些小分子化合物，但可让其在筛孔中自由地扩散、渗透。 样品由进样阀进入层析柱，小分子物质能进入凝胶颗粒的内部，而大分子物质却被排阻在外部，溶液中的物质就按不同分子质量筛分开。柱后面连有的检测仪能检测出目标产物的出峰时间，并由电脑记录，从而可实现目标产物的定时收集。 凝胶色谱原理 图为用凝胶过滤层析技术分离两种目标产物的示意图。将含有两种不同分子量的混合样品小心自柱顶端加入，接着连续以水或其他溶液进行洗脱，并用分部收集器收集洗脱液，测定每管物质浓度，然后以洗脱体积为横坐标，各物质浓度为纵坐标作图，即得洗脱曲线。 通过图谱可以进行组分成分鉴定及含量的测定。 (二) 凝胶层析操作步骤 1．装柱：有些凝胶是干燥颗粒，使用前须吸胀；注意在柱装好后，任何时间都不能使液面低于凝胶表面，否则会影响分离效果。 2．加样：要使样品均匀地进入凝胶床，要在溶剂表面恰好与凝胶表面相平时加进样品。当样品进入凝胶床，样品液面到达凝胶床表面时，加入洗脱液。 3．洗脱：凝胶层析用的所有的洗脱液均以能溶解被洗脱物质和不使其变性或失活为原则。 并且洗脱用的液体应和凝胶溶胀时以及凝胶柱平衡时所用的液体完全相同， 4．再生：用水进行逆向冲洗，再用缓冲液进行平衡。平衡完毕后，即可重复使用。 5.保存：使用过的凝胶柱，若要短时间保存，则需进行反复洗涤除去蛋白质等杂质，并加入适当的防霉剂，如醋酸汞、三氯乙醇等；若要长时间保存，则需将凝胶从柱中取出，进行洗涤、脱水和干燥。 * 第五章 离子交换与色谱分离设备 第一节 离子交换过程原理与设备 第二节 色谱分离原理与设备 第三节 吸附分离及设备（自学） 第一节 离子交换过程原理与设备 一 离子交换过程与原理 离子交换法是应用合成的离子交换剂作为吸附剂，将溶液中的物质，依靠库仑力吸附在交换剂上，然后用合适的洗脱剂将吸附物质从交换剂上洗脱下来，达到分离、浓缩、提纯的目的。生物工业中最常用的交换剂为离子交换树脂。几乎所有的生物大分子都是极性的，都可使其带电，所以离子交换法已广泛用于生物大分子的分离纯化。 离子交换树脂的结构组成 a:交联的具有三维空间立体结构的网络骨架，通常不溶于酸、碱和有机溶媒，化学稳定性良好； b:联接在骨架上的功能基（活性基）及