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实验十五:包埋法固定SOD及固定化酶性质测定;一、实验目的要求;二、实验原理;;;包埋法 将酶包裹于凝胶网格或聚合物的半透膜微囊中,使酶固定化。所用的凝胶有琼脂、海藻酸盐以及聚丙烯酰胺凝胶等;用于制备微囊的材料有聚酰胺、聚脲、 聚酯等。将酶包埋在聚合物内是一种反应条件温和,很少改变酶蛋白结构的固定化方法,此法对大多数酶、粗酶制剂、甚至完整的微生物细胞都适用。但此法较适合 于小分子底物和产物的反应,因为在凝胶网格和微囊中存在有分子扩散效应。加大凝胶网格,有利于分子扩散,但使凝胶的机械强度降低。;固定化酶的应用 ;;
本实验是用一定浓度的聚丙烯酰胺作为包埋剂,将SOD包埋在多孔的网状结构的聚丙烯酰胺凝胶内而制成固定化酶。
SOD活力计算:
对照OD值-样品OD值
SOD活力(U/ml)= x稀释倍数
对照OD值*50%
(每毫升反应???中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位);测定原理;三、实验步骤;2.球状固定化酶的制备:用取样器吸取50μL ,分别滴加到白瓷板的20个孔中,待凝胶聚合。
3.冲洗凝胶表面未固定化的SOD酶。
用蒸馏水洗涤球状固定化酶3-5次。
4.固定化酶活性测定:采用黄嘌呤氧化法测定SOD活力.
;;5. 固定化酶热稳定性的测定;四、实验结果与分析
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