神经信号与电生理学方法(li)课件.pptVIP

神经系统的信号传递与电生理学研究方法;一、神经系统的信号传递;;1. 神经元轴突内神经活动的电变化;Measuring the resting membrane potential;神经纤维静息电位与动作电位波形与产生机制;Structure of the voltage-gated sodium channel;2. 神经元-神经元间化学性突触传递;2. 神经元-神经元间化学性突触传递;2. 神经元-神经元间化学性突触传递;A membrane ion channel ?The properties: ion selectivity and gating.;;;二、电生理学方法;; 电记录的技术 (A) 细胞外记录法记录法记录单个细胞或一群细胞的电活动。 (B) 微电极细胞内记录法记录膜内外的电位差：静息电位和动作电位。 (C) 膜片钳记录法记录当膜上单个通道开启或关闭时的电流。;?工作原理：把引导电极安放在神经组织的表面或附近引导神经组织的电活动。活动部位的神经元去极化，未活动部位极化状态，在容积导体中两部位电位不同，电流流动，放置在细胞表面的电极会纪录出两者间的电位差。 ?优点：方便，电极不插入细胞。 ?特点：细胞外电位的波形因记录细胞的不同部位而异;Wang et al., J Comp Neurol, 2001;细胞内纪录 Intracellular Single Unit Recording;细胞内纪录 Intracellular Single Unit Recording;图 用微电极在猫脊髓运动神经元内记录的突触后电位 A.B.C:三种不同的阈下刺激； D:10次刺激引起的峰电位。; 20世纪50年代，Hodgkin and Huxley 首次应用电压钳技术对枪乌贼的标本进行膜电流的测定。 ?工作原理：离子流过通道所形成的离子流是形成动作电位的基础。电生理实验以电流作为刺激源，使可兴奋细胞产生兴奋，然后测定其膜电压以确定离子通道的状态。但在形成动作电位时所产生的离子流可影响膜电位，而膜电位的变化又会影响该离子的通透性的变化。因而，须人为地使膜电位在一定时间内维持在一个固定水平。电压钳技术是通过插入细胞内的一根微电极人为向胞内补充电流，补充的电流正好等于跨膜流出的反相离子电流（大小相等方向相反）。 ?意义 ：1）确保膜通透性发生改变时，控制膜电位始终维持在指令电位的水平；2）通过电流检测装置，记录到补充入胞内的注入电流，它相当于离子电流的反相电流。这样可测定在不同膜电位水平的离子电流，了解膜通道的电导及功能活动。;应用：定量分析刺激与细胞后膜电导的变化。反映整个细胞膜上所有通道活动的综合结果。 不足：此项技术不能了解单个离子通道的功能活动状态。另外，牵制的面积大，包含大量的随机开放和关闭的通道，形成的背景噪音也大，掩盖单一通道的微弱电流，另外，小神经元插入两个电极不容易。;;? 1976年由德国Neher 和Sakmann 发明（1991 Nobel Prize）。 ?工作原理：同电压钳，即在人为设置电压并固定的情况下记录分析离子通道。膜片钳技术使用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个mm2的细胞膜通过负压吸引封接起来。由于电极尖端与细胞膜的高阻封接，在电极尖端下的那片膜与膜的其他部分从电学上隔离。因此，片膜内通道开放所产生的电流流进玻璃吸管，用一个极为敏感的膜片钳放大器测量此电流强度，即代表单一离子通道电流。 ?性能：电极尖端(1~5?m)与膜之间电阻?10 9 ? （ G?, 10G~100G?）的高封接（giga-seals）, 大大提高了膜片钳的可靠性和灵敏性，可测量0.06pA的电流，1?m的空间分辨力和10?s时间的分辨力。 ?意义：膜上电压依赖型离子通道有开与关两种电导状态。通道膜片钳技术可直接观察离子通道“开启”和“关闭”。;Patch clamping record ionic currents through single channels ? The patch contains a voltage-gated Na+ channel, ? Changing the membrane potential from –65 mV to –40 mV, ? Cause the channel to open,and current (I) will flow through it (e). ?The amplitude of the measured current at a constant membrane voltage reflects the channel conductance, and the duration of the current