代谢控制发酵的基本思想2课件.ppt

第三章 代谢控制发酵的基本思想 第二讲 基本思想： 一 切断支路代谢 二 解除菌体自身的反馈调节 三 去除终产物 四 增加前体物的合成 五 特殊调节机制的利用 六 条件突变株的应用 七 选育不生成副产物的菌株 八 选育生产代谢拮抗物质的菌株 四. 增加前体物的合成 通过选育某些营养缺陷型或结构类似物抗性突变株以及克隆某些关键酶的方法，增加目的产物的前体物的合成，有利于目的产物的大量积累。 (1) 在分支合成途径中，切断目的产物外的其他控制共用酶的终产物分支合成途径，增多目的产物的前体，使目的产物的产量提高。 例1 预苯酸 苯丙酮酸 L-苯丙氨酸 前酪氨酸 L-酪氨酸 预苯酸脱氢酶PD 预苯酸脱水酶PT PD缺陷型 葡萄糖 丙酮酸 丙氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸 半醛 苏氨酸 二氢吡啶 二羧酸 赖氨酸 亮氨酸 协同反馈抑制 L-氨基酸 α- 酮酸 A B 乳糖发酵短杆菌中赖氨酸,丙氨酸的生物合成途径及其调节 A：L-氨基酸丙酮酸转氨酶 B：天冬氨酸-β-脱羧酶 反馈阻遏 反馈抑制 抗S-（2-氨乙基）-L-半胱氨酸 丙氨酸缺 陷型 （2）目的产物的生物合成从别的终产物（氨基酸等）开始时（即别的终产物是目的产物生物合成的前体），除设法解除目的产物自身合成的反馈调节外，也应该设法解除其前体物合成的调节。 举例： 选育异亮氨酸菌株时，苏氨酸是异亮氨酸的前体物。为了积累异亮氨酸，除设法解除异亮氨酸自身合成的反馈调节外，还需设法解除苏氨酸的反馈调节，增加异亮氨酸的产量。 葡萄糖 天冬氨酸 天冬氨酸半醛 高丝氨酸 苏氨酸 α-酮丁酸 异亮氨酸 赖氨酸 蛋氨酸 高丝氨酸脱氢酶 抗苏氨酸结构类似物2-氨基-3-羟基戊酸（AHVr）突变株 （3）在生物合成途径中,分支点的分解途径的代谢流增强，使分支点处的中间产物增多，导致目的产物的积累增加。 葡萄糖 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸 乙酰CoA 乙酸 乙酰磷酸 柠檬酸 顺乌头酸 异柠檬酸 草酰乙酸 苹果酸 反丁烯二酸 琥珀酸 a-酮戊二酸 乙醛酸 乙酰CoA L-谷氨酸 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ 黄色短杆菌由葡萄糖和乙酸合成谷氨酸的代谢途径 磷酸转乙酰酶 ② ② 磷酸转乙酰酶 （4）利用基因工程技术，将生物合成途径中的关键酶基因克隆到 多拷贝质粒上，使其大量扩增，从而也就增加了目的产物的前体物的合成。 近年来已见报道的有苏氨酸、色氨酸、脯氨酸、缬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和谷胱甘肽等氨基酸育种应用重组DNA技术提高产量。 有报道将具有结构类似物抗性的E.coli K12菌株中Thr操纵子与pBR322质粒相结合，获得重组质粒再转移给适当的受体菌，由于基因扩增，此基因工程菌可产苏氨酸达55g/L，比原株提高3～4倍。 一个细胞在代谢调节中产生阻遏物的量仅满足于和操纵基因结合，如果细胞中含有很多的操纵基因和结构基因，那么一个调节基因所产生的阻遏物就不足以阻遏全部操纵子的活力，因而逃避了调节基因产生的阻遏作用，称为“逃避合成”，这是最直接的提高目的产物产量的方法之一。 例如，β-半乳糖苷酶、青霉素酶、氯霉素转酰酶和天冬氨酸转氨甲酰酶，可借助含有相应结构基因的质粒转移给受体培养物来增加产量；利用含有对苯丙氨酸合成酶编码的结构基因的转导噬菌体可使该酶产量增加15倍。 小结： 增加前体物合成的途径： 切断分支代谢途径 解除前体物的反馈调节 增强分支点代谢流 增加关键酶的表达 五、特殊调节机制的利用 1.多种产物控制机制的利用 2.平衡合成的利用 3.代谢互锁的利用 4.优先合成的变换 1.多种产物控制机制的利用 在多种产物控制机制中，只有当反馈控制有关的全部终产物同时过剩存在时，才产生完全的或最大的反馈控制。任一种终产物过量时，完全不产生或产生部分的反馈控制。利用这种特性，可设法控制目的产物以外的终产物供给量，使目的产物积累。 天冬氨酸 天冬氨酰磷酸 天冬氨酰半醛 二氢吡啶二羧酸 赖氨酸 高丝氨酸 O-乙酰高丝氨酸 蛋氨酸 O-磷酸高丝氨酸 苏氨酸 异亮氨酸 天冬氨酸激酶 高丝氨酸脱氢酶 高丝氨酸激酶 黄色短杆菌赖氨酸的合成调节 TD HT 反馈控制 高丝氨酸脱氢酶缺陷 高丝氨酸激酶缺陷 2.平衡合成的利用 A B C D E F G a b 底物A经分支合成途径生成E和G，由于a酶的活性大于b酶，结果优先合成E。E过量后就抑制a酶，使代谢转向G。G过量后就会拮抗或逆转E的反馈抑制作用，结果使代谢流转向合成E，如此循环不已。 在平衡合成机制中，由于第二个终产物的过剩逆转反馈控制，所以，尽管存在反馈控制也能积累目的产物。 举例： 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸 乙酰CoA 柠檬酸 草酰乙酸 天冬氨酸 黄色