第一章蛋白质化学1课件.ppt

2、组氨酸的侧链咪唑基： 与重氮苯磺酸也能形成相似的化合物，但颜色稍有差异，呈棕红色。 3、精氨酸的侧链胍基： 在硼酸钠缓冲液(pH8-9, 25-35℃)中，与1，2-环己二酮反应，生成缩合物： 4、半胱氨酸侧链上的巯基（－SH） （1）与卤化烷生成稳定的烷基衍生物 可保护 -SH 以防被氧化。 + ICH2COO- 碘乙酸 CH2COO－　 ＋　I－ （2）巯基能和各种金属离子形成络合物 -SH 酶遇到重金属离子而生成硫醇盐时，将导致酶失活。 对羟基汞苯甲酸 （3）巯基易受空气或其他氧化剂氧化　　　　　－－－－形成两种氧化衍生物 形成二硫化物：胱氨酸的形成。 胱氨酸 二硫键 （4）形成磺酸基：对游离的巯基具有保护作用，保护Cly巯基之间的氧化。 + HCOOOH 过甲酸 O3H　 5、羟基（－OH） 丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸－－?磷酸酯。 Pi + HPO4 2- 六、氨基酸混合物的分析分离 { 层析系统 固定相 { 流动相 附着在固相上的液体 固体 氨基酸的分离鉴定： （1）纸层析法 （2）薄层析法 （3）离子交换柱法 （4）高效液相分析法 （1）纸层层析 层析缸 展层剂 正丁醇:冰醋酸:水=4:1:5 0.25%的比例将茚三酮 溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：Rf =原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离= X/Y 3、氨基酸的吸光性 在近紫外光区域（220—300nm）只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。 酪氨酸的最大光吸收波长（λmax）在275nm，ε275=1400； 苯丙氨酸的λmax在275nm，ε275=200； 色氨酸的λmax在280nm, ε280 =5600。 利用分光光度法很方便地测定蛋白质的含量。 三、氨基酸的酸碱性质 （一）兼性离子 兼性离子（两性离子）：所谓两性离子是指在同一个氨基酸分子上带有能放出质子的—NH3+正离子和能接受质子的—COO-负离子。因此，氨基酸是两性电解质。 （二）氨基酸的解离 pIpH 带负电，向阳极移动 pIpH 带正电，向阴极移动 pI＝pH不带电，不移动 氨基酸可以做缓冲试剂 （三）氨基酸的等电点 当溶液为某一pH值时，AA的氨基和羧基的解离度完全相等，正负离子浓度相等。AA主要以兼性离子的形式存在，分子中所含的正负电荷数目相等，净电荷为0。这一pH值即为AA的等电点（pI）。 在pI时，AA在电场中既不向正极也不向负极移动，即处于两性离子状态。 在pI时，AA的溶解度最小。 侧链不含离解基团的中性AA pI = (pK’1 + pK’2 )/2 甘氨酸滴定曲线 对于侧链含有可解离基团的AA pI 取决于两性离子两边pK’值的算术平均值 酸性AA：pI = (pK’1 + pK’R-COO- )/2 碱性AA：pI = (pK’2 + pK’R-NH2 )/2 四、氨基酸的化学反应　 （1）α-氨基参加的反应 （2）α-羧基参加的反应 （3）α-氨基和α-羧基共同参加的反应 （4）侧链R基参加的反应 氨基酸的化学反应 亚硝酸盐反应 烃基化反应 酰化反应 脱氨基反应 西佛碱反应 侧链反应 成盐成酯反应 成酰氯反应 脱羧基反应 叠氮反应 (1) α-氨基参加的反应 ①与亚硝酸反应（范斯莱克法测定氨基酸氮的依据） 可用来进行氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。 室温下 ②氨基酸的甲醛滴定(用于氨基酸定量分析) 氨基酸不能直接用酸、碱滴定来进行定量测定。 R—CH—COO- NH3+ R—CH—COO- NH2 + H+ OH- 中和滴定 HCHO R—CH—COO- NHCH2OH HCHO R—CH—COO- N(CH2OH)2 应用：氨基酸定量分析—甲醛滴 定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。 是生物化工产品、食品和发酵物等产品中氨基氮的测定原理和方法 ③与2,4－二硝基氟苯（DNFB或FDNB，Sanger试剂） 首先被英国的Sanger鉴定多肽蛋白质的N末端氨基酸。 DNP-氨基酸 黄色 2,4－二硝基氟苯 弱碱性溶液 二硝基苯基氨基酸 Frederick Sanger? (桑格) 英国化学家，在生物化学领域的贡献很大，他两次获诺贝尔奖1958和1980年；1953年确定了牛胰岛素一级结构；1975年和1977年确定了DNA的两种用酶测序的方法加减法和终止法。 ④与酰化试剂反应 氨基酸的氨基与酰氯或酸酐在弱碱溶液中发生作用时，氨基被酰基化。 丹磺酰氯 氨基酸 丹磺酰衍生物 用于多肽链N末端氨基酸的标记和微量氨基酸的定量